АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Содержащими алкалоиды

Цель занятия: Изучить лабораторную диагностику отравлений растениями, содержащими алкалоиды.

При подозрении на отравление животных алкалоид содержащими растениями в лабораторию направляют пробы корма, отобранные в соответствии с требования­ми Ветеринарного законодательства СССР, патологоа-натомический материал (содержимое желудка или руб­ца, мочи, внутренние органы, мышцы).

Обнаружение и идентификация алкалоидов осуще­ствляется в три этапа: изоляция, обнаружение в изо­лированном остатке и хроматографическая идентифи­кация.

Изоляция алкалоидов. 100 г измельченного кор­ма заливают дистиллированной водой в соотношении 1:4 для сочных и 1:10 для сухих. При постоянном поме­шивании содержимое подкисляют 10 %-ным раствором серной кислоты до рН 3, после чего выдерживают на водяной бане в течение 2 ч при температуре 40 °С. Вы­тяжку из сочных кормов сразу, из сухих через 24 ч на­стаивания сцеживают, фильтруют в делительную ворон­ку и обрабатывают 2 раза 30 мл хлороформа.

После отделения хлороформа водную вытяжку под­щелачивают 10 %-ным раствором аммиака до рН 9 и 3 раза обрабатывают хлороформом по 50, 30 и 20 мл, сливая после отделения в одну емкость. Затем фильтру­ют ее через смоченный хлороформом бумажный фильтр и ИИвляяяют в вытяжном шкафу. Для обнаружения алкалоидов используют полученные из щелочного во­дного извлечения хлороформенные вытяжки.

Изоляция алкалоидов из патматериал а. Навески измельченного патматериала до 100 г поме­щают в широкогорлые колбы емкостью 750 мл, залива­ют водой в соотношении 1:4 (кроме мочи) и подкисляют винной, виннокаменной или щавелевой кислотами до рН 3 (по индикаторной бумажке). После тщательного сме­шивания содержимого колбы ставят в водяную баню при температуре 40 °С на 1 ч. После 2-часового остыва­ния жидкость фильтруют через ватный фильтр в дели­тельную воронку и 3 раза обрабатывают хлороформом по 25 мл в течение 10 мин. Если отделение хлороформен-ного слоя затруднено ввиду образования эмульсии, то ее центрифугируют в течение 10 мин при 3—4 тыс. об/мин.

После отделения хлороформа водную вытяжку под­щелачивают (лучше на холоду) 10 %-ным раствором аммиака до рН 9 и обрабатывают так же, как и при изоляции алкалоидов из кормов.

Обнаружение алкалоидов в изолиро­ванном остатке. С этой целью предложено не­сколько способов, но наибольшее распространение получило обнаружение при помощи реактива Драгендорфа.

Для ускорения испарения хлороформа в изолирован­ном остатке целесообразно содержимое химического стакана продувать с помощью вентилятора. После сгущения вытяжку каплями при помощи ка­пилляров наносят на заранее подготовленные полоски размером ЗХ 7 см из чистой хроматографической бума­ги марки «М» или беззольного фильтра с синей полосой в центре. Вытяжку наносят в четыре точки, помечая их карандашом 1, 3, 5 и 15, что соответствует числу наноси­мых капель (очередную каплю в одно место наносят после испарения предыдущей).

После высыхания бумагу проявляют в одном из реактивов, приготовленных заблаговременно по прописи:

реактив 7:8,5 г основного висмута нитрата растворя­ют в 400 мл воды, после чего добавляется 100 мл уксус­ной кислоты. Отдельно 80 г калия йодида растворяется в 200 мл воды. Оба раствора смешивают и выдерживают в темноте в течение месяца. Реактив для проявления готовят из 20 мл основного раствора, 20 мл уксусной кислоты в 100 мл воды. Чувствительность реакции 3— 5 мкг;

реактив 2:200 г винной кислоты и 17 г основного висмута нитрата растворяют в 800 мл воды; 160 г калия йодида растворяют в 400 мл воды. Оба раствора смеши­вают и хранят в темном месте.

Реактив для проявления готовят из 10 мл основного раствора, 10 г винной кислоты и 50 мл воды. Чувстви­тельность реакции 1—3 мкг.

При наличии алкалоидов в извлечениях на бумаге появляются красные или малиновые пятна, которые осо­бенно хорошо видны после отмывания бумаги водой до полного обесцвечивания фона. При высоком содержа­ИИ алкалоидов пятно появляется после первой капли, при меньшем — после последующих. Это дает возмож­ность судить о примерном количественном содержании яда в исследуемом объекте.

Хроматографическая идентификация алкалоидов проводится на бумаге или в тонком слое. Эти методы требуют наличия эталонных образцов чистых алкалои­дов или смеси их, выделенной из заведомо известного растения.

Контрольные вопросы:

1 Изоляция алкалоидов?

2 Обнаружение алкалоидов?

Дата добавления: 2015-02-06 | Просмотры: 1246 | Нарушение авторских прав