АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология
|
Д. Определение субпопуляционного состава лимфоцитов крови
Тестирование субпопуляций лимфоцитов крови по CD-маркерам (СD3+, СD4+, СD8+) проводят методом проточной цитофлюориметрии с применением моноклональных антител.
Выделенные клетки культивируют в полной питательной среде в стерильном планшете, можно использовать планшет для ИФА, в количестве 2х106 на объем лунки (250 мкл). После культивирования клетки собирают в пластиковые пробирки для проточного цитофлюориметра, отмывают фосфатным буфером (рН=7,2) и окрашивают стандартными атнителами, меченными FITC, в объеме 20 мкл. Затем клетки собрают в пробирку, отмывают в 500 мкл ФСБ, центрифугируют 5 мин при 1,5 тыс. об/мин; супернатант удаляют аспирацией. После добавления 5 мкл меченых антител и 500 мкл ФСБ; пробы встряхивают на вортексе для смешивания антител с клетками.
Анализ проводят с использованием цитофлюориметра на основе определения малого углового светорассеяния (FSC), характеризующего размер клетки, и бокового светорассеяния (SSC), характеризующего цитоплазматические, а также мембранные особенности клетки. Анализируют параметры зеленой (FITC – 530 нм) флюоресценции на FL1-канале. Параметры напряжения для регистрации показателей на проточном цитометре задают согласно указаниям в инструкции к набору. Результаты выражают в относительных (%) и абсолютных (тыс/мкл) значениях.
Дата добавления: 2015-01-12 | Просмотры: 728 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 |
|