АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Дифференцировка лимфоцитов на кластеры дифференциации

По поверхностным CD-маркерам

Изучение лимфоцитов начинается с их выделения из крови. Мононуклеарные лейкоциты (лимфоциты, моноциты) отделяют от других клеток крови (гранулоцитов и эритроцитов) центрифугированием в градиенте плотности специальной смеси препаратов (фиккол, верографин). Имеющие большую плотность эритроциты и гранулоциты образуют осадок на дне пробирки, а мононуклеарные клетки образуют кольцо на поверхности градиентной смеси, откуда могут быть перенесены в отдельную пробирку и отмыты от градиентной смеси. Дифференцировка популяций и субпопуляций лимфоцитов связана с выявлением поверхностных CD-маркеров – антигенов (табл. 19) с помощью соответствующих специфических антител. Суть метода заключается в связывании дифференцировочных антигенов (поверхностных CD-маркеров) лимфоцитов с моноклональными антителами и дальнейшим их окрашиванием антиглобулиновыми антителами, меченными флюрохромом (метод непрямой иммунофлюоресценции). Затем происходит подсчет меченых клеток.

Таблица 19

Количественное содержание лимфоцитов крови здоровых людей

Определение количества лимфоцитов разных популяций (субпопуляций) по поверхностным маркерам проводится с помощью двух методик:

· Люминесцентной или световой микроскопии мазков крови или взвеси мононуклеаров, обработанных соответствующими моноклональными антителами, меченными флюорохромом или ферментом (для одного образца занимает неделю);

· Автоматического подсчета клеток с использованием проточного цитофлюориметра (для одного образца занимает несколько часов).

В крови у взрослых содержание Т-лимфоцитов (CD3⁺-клетки) обычно составляет 1,1-1,7·10⁹/л (56-78%). Повышенное их количество свидетельствует о гиперреактивности иммунитета, что также наблюдается при острых и хронических лимфолейкозах. Снижение абсолютного числа Т-лимфоцитов говорит о недостаточности клеточного иммунитета, что довольно часто встречается при воспалениях разнообразной этиологии. Повышение числа Т-лимфоцитов в динамике заболевания – клинически благоприятный признак. Полное завершение болезни обычно сопровождается и нормализацией количества Т-лимфоцитов.

Увеличение абсолютного числа CD4⁺-клеток (Т-лимфоциты-хелперы) свидетельствует о стимуляции иммунной системы каким-либо антигеном и служит подтверждением гиперреактивных синдромов. Снижение числа Т-хелперов говорит о гипореактивном синдроме с нарушением регуляторного звена иммунитета. Особенно наглядно это определяется при ВИЧ-инфекции. Повышение количества CD8⁺-клеток (цитотоксических Т-лимфоцитов) определяется практически при всех вирусных, бактериальных, протозойных инфекциях. Относительное увеличение CD8⁺-клеток обычно обусловлено уменьшением числа Т-хелперов, хотя такую закономерность наблюдают не всегда. Уменьшение количества цитотоксических Т-лимфоцитов служит подтверждением недостаточности клеточно-эффекторного звена иммунитета, что особенно важно при лечении хронических вирусных заболеваний (вирусных гепатитов, герпеса и др.).

Снижение количества NK-клеток – признак клеточно-эффекторного иммунодефицита, обусловленного онкологическими заболеваниями и тяжелыми вирусными инфекциями, приемом иммунодепрессантов. Увеличение количества NK-клеток связано с активацией антитрансплантационного иммунитета, т.е. является признаком клеточно-опосредованной цитотоксичности.

В настоящее время типируются и другие маркеры, их сейчас насчитывается около 250 разновидностей. Особенно это важно в онкогематологии для уточнения диагноза.

Анализ функциональной активности Т- и В-лимфоцитов