АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Среды для идентификации энтеробактерий

Среда Олькеницкого (в модификации без сахарозы). Расплавляют 25 г сухого питательного агара в 1 л дистиллированной воды и остужают до 50 ⁰С. Затем добавляют 10 г лактозы, 0,2 г соли Мора, 0,5 г гипосульфи­та, 1 г глюкозы, 10 г мочевины. Соль Мора, гипосульфит, углеводы, моче­вину предварительно растворяют в небольшом количестве дистиллирован­ной воды. Все ингредиенты хорошо перемешивают с агаром, фильтруют через стерильную марлю, устанавливают рН 7,2 - 7,4. Добавляют 4 мл 0,4 % водно-щелочного раствора фенолового красного, разливают в стерильные пробирки. Стерилизуют текучим паром 3 дня по 20 мин или при 112 ⁰С 20 мин. Скашивают по типу среды Ресселя (скошенный столбик). Готовая среда бледно-розового цвета.

Среда Клиглера. Сухая среда. Приготовление по указанию на этикетке.

Среда Клиглера. Состав: мясной бульон - 1 л, пептон - 20 г, NaCI - 5 г, Na₂SO₃ - 0,4 г, Na₂S₂O₃-5H₂O - 0,08 г, агар - 2 г, лактоза – 10 г, глюкоза - 1 г, FeS0₄ -0,5 г, феноловый красный (0,2 % раствор в 50 % этиловом спирте) - 12 мл.

К бульону добавляют пептон, NaCI, Na₂SO₃, Na₂S₂O₃-5H₂O, агар, уста­навливают рН 7,8, нагревают, фильтруют через вату. Затем добавляют сульфат железа, растворенный в небольшом количестве воды, лактозу, глю­козу и раствор индикатора. Разливают в стерильные пробирки, стерили­зуют при 112 ⁰С 20 мин, скашивают по типу “скошенный столбик”. Среда Кристенсена с мочевиной.

Р а с т в о р №1: в 100 мл дистиллированной воды растворяют 1 г пеп­тона, 5 г хлорида натрия, 1 г глюкозы, 2 г КН₂РО₄, 20 г мочевины, 6 мл фенолового красного (0,2 % водного раствора), устанавливают рН 6,8 - 6,9. Стерилизуют текучим паром 20 мин.

Р а с т в о р №2: к 900 мл дистиллированной воды добавляют 15 г ага­ра и стерилизуют при 120 ⁰С 30 мин. Остужают раствор №2 до 40 – 50 ⁰С и смешивают со 100 мл раствора №1. Разливают в стерильные пробирки и скашивают.

Цитратный агар Симмонса. Сухая среда. Приготовление по указанию на этикетке.

Среда Симмонса. В 1 л дистиллированной воды растворяют при нагре­вании 1,5 г фосфата натрия-аммония, 0,2 г сульфата магния, 3 г нейтраль­ного цитрата натрия, 20 г агар-агара. Устанавливают рН 7,2. Прибавляют 10 мл 1,5 % спиртового раствора бромтимолового синего, фильтруют, раз­ливают по пробиркам (флаконам), стерилизуют при 120 ⁰С 15 мин. Скаши­вают или разливают в чашки Петри.

Посев на среду делают небольшим количеством агарной культуры бак­терий (без примеси питательной среды). Среда зеленого цвета, при росте цитратассимилирующих бактерий окрашивается в синий цвет.

Ацетатный агар. Сухая среда. Приготовление по указанию на этикетке.

Ацетатная среда. В 1 л дистиллированной воды растворяют при нагре­вании 15 г агар-агара, добавляют 5 г NaCI, 0,2 г MgSO₄7H₂O, 1 г (NH₄)H₂P0₄, 1 г K₂HPO₄, 2 г уксуснокислого натрия. Устанавливают рН 7,2 - 7,4. Добавляют индикатор - 10 мл 1,6 % спиртового раствора бромтимолового синего. Разливают в пробирки или колбы, стерилизуют при 115 ⁰С 20 мин, разливают в чашки или скашивают в пробирках. Посев на среду делают небольшим количеством агаровой культуры бактерий (без примеси питательной среды). Среда зеленого цвета, при росте ацетатассимилирующих бактерий окрашивается в синий цвет.

Среда для определения декарбоксилаз лизина, орнитина и дигидролазы аргинина у энтеробактерий. Состав: пептон - 1 г, мясная вода - 50 мл, глюкоза - 1 г, хлорид натрия - 3 г, магний сернокислый - 0,1 г, калий фосфорнокислый одно-замещенный - 1,5 г, никотиновая кислота - 0,2 г, витамин B₆ - 0,05 г, 1,6 % спиртовой раствор бромтнмолового синего - 5 мл, вода дистиллиро­ванная - до 1 л. Разделить среду на 4 части. Добавить в каждую часть среды, кроме четвертой, по 0,5 % одной из L-аминокислот (лизин, арнитин, аргинин) или по 1 % DL-форм тех же аминокислот. Проверить и устано­вить рН 6,0 - 6,2. Четвертая часть среды без аминокислот служит контро­лем.

Разлить среду в стерильные пробирки по 1 - 2 мл. Стерилизовать при 112 ⁰С 20 мин. Исходный цвет среды желтый. При наличии декарбоксилаз указанных аминокислот у бактерий цвет среды изменяется через 24 - 48 ч инкубации до зеленой или синей окраски; цвет среды в контроле остается без изменений. Целесообразно заливать поверхность среды после посева бактерий слоем стерильного вазелинового масла.

Среда для определения триптофандезаминазы и методика теста. Со­став среды: пептон сухой ферментативный (Семипалатинский) - 1 г, нат­рия хлорид - 0,5 г, DL-триптофан - 0,5 г, вода дистиллированная - до 100 мл. Стерилизовать при 120 ⁰С 30 мин. Разлить по 1 мл в стерильные пробирки.

После 18 - 24 ч инкубации посевов при 37 ⁰С вносят в среду 1 - 2 кап­ли (0,05 мл) реактива (смесь равных объемов 10 % водного раствора FeС1з и 10 % соляной кислоты). При наличии триптофандезаминазы у исследуе­мых бактерий исходный желтый цвет среды изменится на темно-коричне­вый или красно-бурый.

Среды Гисса для определения ферментации углеводов и спиртов. В дис­тиллированной воде растворяют при нагревании пептон (1 %), хлорид нат­рия (0,5 %), прибавляют 1 % индикатора Андреде или 0,1 % спиртового (1,6 %) раствора бромтимолового синего, устанавливают рН 7,2. Затем ки­пятят 5 мин, фильтруют, доливают до первоначального объема дистилли­рованной водой. Добавляют по 0,5 - 1% одного из углеводов или спиртов, разливают по 2 - 3 мл в стерильные пробирки. Среду с глюкозой разли­вают в пробирки с поплавками. При изготовления полужидких сред сле­дует добавлять 1 % углеводов и 0,4 % агар-агара. Стерилизация текучим паром по 30 мин 3 дня или при 112 ⁰С 15 мин.

Питательная среда с индикатором ВР и углеводами (спиртами). Су­хие среды. Содержат один из углеводов или спиртов (глюкоза, лактоза, сахароза, мальтоза, маннит, дульцит, рамноза). Приготовление по указа­нию на этикетке. Индикатор ВР, входящий в среду, имеет в кислой среде синюю окраску, в щелочной - красную, в нейтральной - бесцветен.

Среда Кларка и методика постановки реакций Фогеса-Проскауэра (на ацетоин) и с метиловым красным. К 800 мл дистиллированной воды добав­ляют 5 г пептона, 5 г глюкозы, 5 г К₂НР0₄, растворяют при нагревании в течение 20 мин, фильтруют через бумажный фильтр, доводят объем до 1 лдистиллированной воды. Разливают по 5 мл в пробирки и стерилизуют те­кучим паром 3 дня по 30 мин или при 112 ⁰С 25 мин.

Реакция Фогеса-Проскауэра на ацетилметилкарбинол (ацетоин). По­сле 1- 3-суточного роста культуры на среде Кларка отбирают пипеткой в пустую пробирку 2 мл среды, добавляют 1 мл 6 % спиртового раствора a-нафтола и 0,4 мл 40 % раствора КОН, помещают пробирку в термостат при 37 ⁰С на 1 ч, после чего учитывают результат: появление красного пли розового окрашивания среды свидетельствует о положительной реакции на ацетоин.

Реакция с метиловым красным (на интенсивность кислотообразования). К оставшейся части 1-3-суточной культуры на среде Кларка добав­ляют 1 - 2 капли 0,25 % спиртового раствора метилового красного. При сильном кислотообразовании среда окрашивается в красный цвет (поло­жительный результат), при желтой окраске результат считается отрица­тельным.

Полужидкий агар для определения подвижности бактерий. К 1 л буль­она Хоттингера (или мясо-пептонного бульона) добавляют 3 г агар-агара, растворяют при нагревании, фильтруют, устанавливают рН 7,2 - 7,4 и раз­ливают в стерильные пробирки высоким столбиком. Стерилизуют при 120 ⁰С 30 мин.

Среда Хью-Лейфсона и методика ОФ-теста (окисление—ферментация глюкозы). Состав среды: пептон - 2 г, натрия хлорид - 5 г, двузамещенный фосфат калия - 0,3 г; глюкоза - 10 г, бромтимоловый синий - 0,03 г; агар-агар - 3 г, вода дистиллированная - 1 л, рН - 7,17 - 7,2. К воде до­бавляют пептон, хлорид натрия, агар-агар. Смесь подогревают до расплавления агара, затем вносят фосфат калия, глюкозу, продолжают кипятить 2 - 3 мин, подщелачивают 20 % раствором едкого натра до рН 7,4 - 7,5, до­водят объем среды до первоначального и добавляют 3 мл 1 % водного ра­створа бромтимолового синего. Фильтруют среду через ватно-марлевый фильтр, разливают по 5 мл в стерильные пробирки, стерилизуют при 112 ⁰С 20 мин. Цвет среды до стерилизации синий, после стерилизации - травя­нисто-зеленый (рН 7,1 - 7,2). При кислой реакции среда желтеет.

П о с т а н о в к а ОФ-т е с т а. В две пробирки со средой Хью-Лейфсо­на засевают уколом в столбик изучаемую культуру. Поверхность среды в одной из пробирок покрывают 0,5 - 1 мл стерильного вазелинового масла. Посевы инкубируют при 37°С 1 - 4 сут. Окисление определяют по желтой окраске среды в аэробных условиях роста, ферментацию - по желтой окраске среды в анаэробных условиях роста. Энтеробактерии расщепляют глюкозу в аэробных и анаэробных условиях.

Среда с 5-нитро-8-оксинохинолином и ионами железа для идентифика­ции бактерий гафния и методика теста (по Е. П. Сиволодскому, 1985). Со­став среды: питательный агар (из сухого питательного агара); 5-нитро-8-оксихинолин (препарат “5-HOK”) - 0,08 - 0,1 г/л, хлорное железо FеС1₃ - 0,8 - 1 г/л, рН - 7,2 - 7,4. Приготовление среды: в колбу с рас­плавленным стерильным питательным агаром (200 мл) добавляют 1,6 - 2 мл раствора 5-нитро-8-оксихинолина с концентрацией 10 мг/мл (раствор готовят, растирая таблетку с 50 мг “5-НОК” в ступке с 5 мл диметилсульфоксида) и 1,6 - 2 мл 10 % водного раствора хлорного железа, перемеши­вают, разливают в чашки Петри. Среда имеет желтую окраску, пригодна к использованию в течение 10 сут при хранении (4 – 8 ⁰С). Каждую партию среды контролируют штаммом гафний, заведомо положительным по дан­ному признаку.

П о с т а н о в к а т е с т а. Исследуемые бактерии (колония со среды первичного посева; агаровая или бульонная чистая культура) засевают петлей густым газоном на сектор дифференциальной питательной среды для гафний (сектор 1/6 - 1/8 чашки Петри), инкубируют при 37 ⁰С 16 - 24 ч, после чего учитывают результат. Положительным результатом счи­тают появление оранжево-красной окраски питательной среды вокруг га­зона выросшей культуры бактерий и под ним. Положительный результат указывает на принадлежность бактерий к виду Hafnia alvei. Бактерии дру­гих видов не дают подобной окраски среды или не растут на ней.

Дата добавления: 2015-08-26 | Просмотры: 1633 | Нарушение авторских прав