АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология
|
Среды для идентификации энтеробактерий
Среда Олькеницкого (в модификации без сахарозы). Расплавляют 25 г сухого питательного агара в 1 л дистиллированной воды и остужают до 50 0С. Затем добавляют 10 г лактозы, 0,2 г соли Мора, 0,5 г гипосульфита, 1 г глюкозы, 10 г мочевины. Соль Мора, гипосульфит, углеводы, мочевину предварительно растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды. Все ингредиенты хорошо перемешивают с агаром, фильтруют через стерильную марлю, устанавливают рН 7,2 - 7,4. Добавляют 4 мл 0,4 % водно-щелочного раствора фенолового красного, разливают в стерильные пробирки. Стерилизуют текучим паром 3 дня по 20 мин или при 112 0С 20 мин. Скашивают по типу среды Ресселя (скошенный столбик). Готовая среда бледно-розового цвета.
Среда Клиглера. Сухая среда. Приготовление по указанию на этикетке.
Среда Клиглера. Состав: мясной бульон - 1 л, пептон - 20 г, NaCI - 5 г, Na2SO3 - 0,4 г, Na2S2O3-5H2O - 0,08 г, агар - 2 г, лактоза – 10 г, глюкоза - 1 г, FeS04 -0,5 г, феноловый красный (0,2 % раствор в 50 % этиловом спирте) - 12 мл.
К бульону добавляют пептон, NaCI, Na2SO3, Na2S2O3-5H2O, агар, устанавливают рН 7,8, нагревают, фильтруют через вату. Затем добавляют сульфат железа, растворенный в небольшом количестве воды, лактозу, глюкозу и раствор индикатора. Разливают в стерильные пробирки, стерилизуют при 112 0С 20 мин, скашивают по типу “скошенный столбик”. Среда Кристенсена с мочевиной.
Р а с т в о р №1: в 100 мл дистиллированной воды растворяют 1 г пептона, 5 г хлорида натрия, 1 г глюкозы, 2 г КН2РО4, 20 г мочевины, 6 мл фенолового красного (0,2 % водного раствора), устанавливают рН 6,8 - 6,9. Стерилизуют текучим паром 20 мин.
Р а с т в о р №2: к 900 мл дистиллированной воды добавляют 15 г агара и стерилизуют при 120 0С 30 мин. Остужают раствор №2 до 40 – 50 0С и смешивают со 100 мл раствора №1. Разливают в стерильные пробирки и скашивают.
Цитратный агар Симмонса. Сухая среда. Приготовление по указанию на этикетке.
Среда Симмонса. В 1 л дистиллированной воды растворяют при нагревании 1,5 г фосфата натрия-аммония, 0,2 г сульфата магния, 3 г нейтрального цитрата натрия, 20 г агар-агара. Устанавливают рН 7,2. Прибавляют 10 мл 1,5 % спиртового раствора бромтимолового синего, фильтруют, разливают по пробиркам (флаконам), стерилизуют при 120 0С 15 мин. Скашивают или разливают в чашки Петри.
Посев на среду делают небольшим количеством агарной культуры бактерий (без примеси питательной среды). Среда зеленого цвета, при росте цитратассимилирующих бактерий окрашивается в синий цвет.
Ацетатный агар. Сухая среда. Приготовление по указанию на этикетке.
Ацетатная среда. В 1 л дистиллированной воды растворяют при нагревании 15 г агар-агара, добавляют 5 г NaCI, 0,2 г MgSO47H2O, 1 г (NH4)H2P04, 1 г K2HPO4, 2 г уксуснокислого натрия. Устанавливают рН 7,2 - 7,4. Добавляют индикатор - 10 мл 1,6 % спиртового раствора бромтимолового синего. Разливают в пробирки или колбы, стерилизуют при 115 0С 20 мин, разливают в чашки или скашивают в пробирках. Посев на среду делают небольшим количеством агаровой культуры бактерий (без примеси питательной среды). Среда зеленого цвета, при росте ацетатассимилирующих бактерий окрашивается в синий цвет.
Среда для определения декарбоксилаз лизина, орнитина и дигидролазы аргинина у энтеробактерий. Состав: пептон - 1 г, мясная вода - 50 мл, глюкоза - 1 г, хлорид натрия - 3 г, магний сернокислый - 0,1 г, калий фосфорнокислый одно-замещенный - 1,5 г, никотиновая кислота - 0,2 г, витамин B6 - 0,05 г, 1,6 % спиртовой раствор бромтнмолового синего - 5 мл, вода дистиллированная - до 1 л. Разделить среду на 4 части. Добавить в каждую часть среды, кроме четвертой, по 0,5 % одной из L-аминокислот (лизин, арнитин, аргинин) или по 1 % DL-форм тех же аминокислот. Проверить и установить рН 6,0 - 6,2. Четвертая часть среды без аминокислот служит контролем.
Разлить среду в стерильные пробирки по 1 - 2 мл. Стерилизовать при 112 0С 20 мин. Исходный цвет среды желтый. При наличии декарбоксилаз указанных аминокислот у бактерий цвет среды изменяется через 24 - 48 ч инкубации до зеленой или синей окраски; цвет среды в контроле остается без изменений. Целесообразно заливать поверхность среды после посева бактерий слоем стерильного вазелинового масла.
Среда для определения триптофандезаминазы и методика теста. Состав среды: пептон сухой ферментативный (Семипалатинский) - 1 г, натрия хлорид - 0,5 г, DL-триптофан - 0,5 г, вода дистиллированная - до 100 мл. Стерилизовать при 120 0С 30 мин. Разлить по 1 мл в стерильные пробирки.
После 18 - 24 ч инкубации посевов при 37 0С вносят в среду 1 - 2 капли (0,05 мл) реактива (смесь равных объемов 10 % водного раствора FeС1з и 10 % соляной кислоты). При наличии триптофандезаминазы у исследуемых бактерий исходный желтый цвет среды изменится на темно-коричневый или красно-бурый.
Среды Гисса для определения ферментации углеводов и спиртов. В дистиллированной воде растворяют при нагревании пептон (1 %), хлорид натрия (0,5 %), прибавляют 1 % индикатора Андреде или 0,1 % спиртового (1,6 %) раствора бромтимолового синего, устанавливают рН 7,2. Затем кипятят 5 мин, фильтруют, доливают до первоначального объема дистиллированной водой. Добавляют по 0,5 - 1% одного из углеводов или спиртов, разливают по 2 - 3 мл в стерильные пробирки. Среду с глюкозой разливают в пробирки с поплавками. При изготовления полужидких сред следует добавлять 1 % углеводов и 0,4 % агар-агара. Стерилизация текучим паром по 30 мин 3 дня или при 112 0С 15 мин.
Питательная среда с индикатором ВР и углеводами (спиртами). Сухие среды. Содержат один из углеводов или спиртов (глюкоза, лактоза, сахароза, мальтоза, маннит, дульцит, рамноза). Приготовление по указанию на этикетке. Индикатор ВР, входящий в среду, имеет в кислой среде синюю окраску, в щелочной - красную, в нейтральной - бесцветен.
Среда Кларка и методика постановки реакций Фогеса-Проскауэра (на ацетоин) и с метиловым красным. К 800 мл дистиллированной воды добавляют 5 г пептона, 5 г глюкозы, 5 г К2НР04, растворяют при нагревании в течение 20 мин, фильтруют через бумажный фильтр, доводят объем до 1 лдистиллированной воды. Разливают по 5 мл в пробирки и стерилизуют текучим паром 3 дня по 30 мин или при 112 0С 25 мин.
Реакция Фогеса-Проскауэра на ацетилметилкарбинол (ацетоин). После 1- 3-суточного роста культуры на среде Кларка отбирают пипеткой в пустую пробирку 2 мл среды, добавляют 1 мл 6 % спиртового раствора a-нафтола и 0,4 мл 40 % раствора КОН, помещают пробирку в термостат при 37 0С на 1 ч, после чего учитывают результат: появление красного пли розового окрашивания среды свидетельствует о положительной реакции на ацетоин.
Реакция с метиловым красным (на интенсивность кислотообразования). К оставшейся части 1-3-суточной культуры на среде Кларка добавляют 1 - 2 капли 0,25 % спиртового раствора метилового красного. При сильном кислотообразовании среда окрашивается в красный цвет (положительный результат), при желтой окраске результат считается отрицательным.
Полужидкий агар для определения подвижности бактерий. К 1 л бульона Хоттингера (или мясо-пептонного бульона) добавляют 3 г агар-агара, растворяют при нагревании, фильтруют, устанавливают рН 7,2 - 7,4 и разливают в стерильные пробирки высоким столбиком. Стерилизуют при 120 0С 30 мин.
Среда Хью-Лейфсона и методика ОФ-теста (окисление—ферментация глюкозы). Состав среды: пептон - 2 г, натрия хлорид - 5 г, двузамещенный фосфат калия - 0,3 г; глюкоза - 10 г, бромтимоловый синий - 0,03 г; агар-агар - 3 г, вода дистиллированная - 1 л, рН - 7,17 - 7,2. К воде добавляют пептон, хлорид натрия, агар-агар. Смесь подогревают до расплавления агара, затем вносят фосфат калия, глюкозу, продолжают кипятить 2 - 3 мин, подщелачивают 20 % раствором едкого натра до рН 7,4 - 7,5, доводят объем среды до первоначального и добавляют 3 мл 1 % водного раствора бромтимолового синего. Фильтруют среду через ватно-марлевый фильтр, разливают по 5 мл в стерильные пробирки, стерилизуют при 112 0С 20 мин. Цвет среды до стерилизации синий, после стерилизации - травянисто-зеленый (рН 7,1 - 7,2). При кислой реакции среда желтеет.
П о с т а н о в к а ОФ-т е с т а. В две пробирки со средой Хью-Лейфсона засевают уколом в столбик изучаемую культуру. Поверхность среды в одной из пробирок покрывают 0,5 - 1 мл стерильного вазелинового масла. Посевы инкубируют при 37°С 1 - 4 сут. Окисление определяют по желтой окраске среды в аэробных условиях роста, ферментацию - по желтой окраске среды в анаэробных условиях роста. Энтеробактерии расщепляют глюкозу в аэробных и анаэробных условиях.
Среда с 5-нитро-8-оксинохинолином и ионами железа для идентификации бактерий гафния и методика теста (по Е. П. Сиволодскому, 1985). Состав среды: питательный агар (из сухого питательного агара); 5-нитро-8-оксихинолин (препарат “5-HOK”) - 0,08 - 0,1 г/л, хлорное железо FеС13 - 0,8 - 1 г/л, рН - 7,2 - 7,4. Приготовление среды: в колбу с расплавленным стерильным питательным агаром (200 мл) добавляют 1,6 - 2 мл раствора 5-нитро-8-оксихинолина с концентрацией 10 мг/мл (раствор готовят, растирая таблетку с 50 мг “5-НОК” в ступке с 5 мл диметилсульфоксида) и 1,6 - 2 мл 10 % водного раствора хлорного железа, перемешивают, разливают в чашки Петри. Среда имеет желтую окраску, пригодна к использованию в течение 10 сут при хранении (4 – 8 0С). Каждую партию среды контролируют штаммом гафний, заведомо положительным по данному признаку.
П о с т а н о в к а т е с т а. Исследуемые бактерии (колония со среды первичного посева; агаровая или бульонная чистая культура) засевают петлей густым газоном на сектор дифференциальной питательной среды для гафний (сектор 1/6 - 1/8 чашки Петри), инкубируют при 37 0С 16 - 24 ч, после чего учитывают результат. Положительным результатом считают появление оранжево-красной окраски питательной среды вокруг газона выросшей культуры бактерий и под ним. Положительный результат указывает на принадлежность бактерий к виду Hafnia alvei. Бактерии других видов не дают подобной окраски среды или не растут на ней.
Дата добавления: 2015-08-26 | Просмотры: 1627 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 | 61 | 62 |
|