АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ДИАРЕЙНЫХ ЗАБОЛЕВАНИИ

Серологические исследования при большинстве диарейных инфекций имеют вспомогательное значение.Они предназначены для подтверждения клинического диагноза при получении отрицательного результата бакте­риологического или вирусологического исследования на патогенные микро­организмы или обоснования этиологической значимости выделенных услов­но патогенных бактерий.

Для исследования необходимы парные сыворотки, взятые в динамике заболевания. Первую сыворотку следует брать в начале болезни (при по­ступлении больного в госпиталь, вторую - на 7 - 10-е сутки). Для полу­чения сыворотки кровь берут натощак из локтевой вены или уколом из пальца.

Кровь из вены в количестве 5 - 6 мл вносят в стерильную пробирку (лучше центрифужную), которую тотчас после взятия ставят на 0,5 - 1 ч в термостат при 37 ⁰С. Образовавшийся кровяной сгусток отделяют от сте­нок стерильной стеклянной палочкой, после чего оставляют на 18 - 20 ч в прохладном месте (4 - 10 ⁰С). Отстоявшуюся сыворотку переносят в дру­гую стерильную пробирку при помощи пастеровской пипетки с резиновым баллоном. При попадании в сыворотку примеси эритроцитов ее центрифу­гируют и сливают с осадка. Сыворотка может оставаться на сгустке не более 48 ч после взятия крови; сыворотка с гемолизированной кровью не­пригодна.

Сыворотка (без примеси эритроцитов) может храниться в стерильных условиях при температуре 4 - 10 0С до 1 мес. При необходимости сохра­нить сыворотку до 2 - 3 мес ее следует заморозить при температуре от -20 до - 70 ⁰С (хранить, избегая оттаивания) или консервировать мертиолятом в конечной концентрации 1: 10000.

Из пальца кровь берут мерной пипеткой в количестве 0,1 - 0,2 мл и вносят в стерильную пробирку, содержащую 0,9 мл или 1,8 мл стерильно­го 0,85 % раствора натрия хлорида (с добавлением 0,25 % цитрата натрия), что соответствует разведению сывороток 1: 10. Для осаждения форменных элементов полученную взвесь центрифугируют или оставляют в холодном месте до утра. Отстоявшуюся сыворотку (разведение 1:10) переносят в стерильную пробирку и используют для последующих двукратных разве­дений.

В полевых условиях можно использовать метод “сухой капли”. На сложенную вдвое фильтровальную или писчую бумагу наносят 0,1 - 0,5 мл сыворотки без примеси эритроцитов. Предварительно на бумаге надписы­вают фамилию больного, дату взятия и количество сыворотки. Сыворотку высушивают при комнатной температуре. Бумагу с высохшей сывороткой складывают в виде пакетика для порошка, который вкладывают в кон­верт. В лаборатории бумагу нарезают ножницами и опускают в пробирку, куда добавляют 0,85 % раствор натрия хлорида до разведения 1:50, из которого делают последующие разведения.

Посуда для серологических реакций должна быть чистой, сухой, сте­рилизация ее необязательна. Пробирки, пипетки не следует помещать в растворы сулемы, карболовой кислоты, формалина, кислот и щелочей. Стекло кипятят в простой воде, пипетки затем просушивают этиловым спиртом и эфиром. Целесообразно ставить серологические реакции в микрообъемах, используя планшеты для иммунологических реакций однократ­ного применения или планшеты титратора Такачи. Парные сыворотки должны исследоваться одновременно сразу после получения второй сыво­ротки.

Серологическая диагностика дизентерии проводится с помощью реакции непря­мой (пассивной) гемагглютинации (РНГА, РПГА). Отечественные пред­приятия выпускают для этой реакции пять видов эритроцитарных диагностикумов (из шигелл Зонне, Флекснера, Флекснера-6, дизентерии-1, дизентерии-2). Реакция ставится с парными сыворотками в соответствии с наставлением к указанным диагностическим препаратам. Днагностически до­стоверным показателем, подтверждающим заболеиание, является увеличе­ние титра антител не менее чем в 8 раз. Установление этиологического ди­агноза острой дизентерии только на основании 4-кратного нарастания титра анти­тел или исследования сыворотки, взятой однократно не ранее 5 - 6-го дня болезни, может приводить к диагностическим ошибкам. Оценивают резуль­таты РНГА в таких случаях с учетом эпидемической обстановки, формы и сроков болезни, при этом титр однократно взятых сывороток дол­жен быть не менее 1: 400. В виду недостаточной чувствительности и специ­фичности нецелесообразно использовать для серодиагностики дизентерии реакцию агглютинации.

Для серологической диагностики сальмонеллеза применяют РНГА и реакцию агглютинации. Для РНГА выпускается комплексный сальмонеллезный эритроцитарный О-диагностикум (О-1, 2, 4, 6, 7, 8, 9, 3, 10, 12) - для основных серогрупп А, В, C₁, C₂, D, E, и эрнтроцитарные О-диагностикумы - для отдельных серогрупп: А (О-1, 2, 12), В (О-1, 4, 12), C₁ (О-6, 7), С₂ (О-6, 8), D (О-1, 9, 12), E (О-3, 10). Реакция с парными сыворотка­ми ставится в соответствии с наставлением к препаратам вначале с ком­плексным сальмонеллезным эритроцитарным О-диагностикумом. При ее положительном результате ставят РНГА раздельно с эритроцитарными О-диагностикумами групп А, В, C₁, С₂, D, Е. Диагностическим титром в РНГА является 1: 200. Нарастание титра антител в динамике в 4 раза и более подтверждает диагностическую значимость реакции. При перекрест­ных реакциях с групповыми эритроцитарными О-диагностикумами реко­мендуется постановка реакции агглютинации с сальмонеллезными Н-монодиагностикумами. Для постановки реакции агглютинации выпускаются: сальмонеллезные О-диагностикумы (2, 4. 7, 8, 9, 3, 10, Vi) и Н-диагностикумы (a, d, с, b, i, r, gm, lv, eh, 1,2; 1,5); диагностикумы из сальмонелл (тифимуриум, холерасуис, энетритидис, ньюпорт, тифи О, тифи ОН, па­ратифа А, паратифа В). Постановка линейной реакции агглютинации, ее учет и оценка проводятся в соответствии с наставлениями к препаратам. При отсутствии стандартных бактериальных диагностикумов можно ис­пользовать в этом качестве живые или убитые штаммы сальмонелл, имею­щие типичную антигенную характеристику (Таблица №7 Приложение №4).

Для серологической диагностики эшерихиозов можно применять РНГА, особенно для выявления антител к липополисахаридам ЭГКП (О157, О26, О103, О111, О145). Однако диагностические препараты для этой реакции не производят. Ре­акцию агглютинации использовать для серодиагностики эшерихиозов не следует ввиду ее недостаточной чувствительности.

На современном этапе серологические исследования являются основ­ным методом этиологической диагностики псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза, так как бактериологический метод длителен и не обеспечивает хорошей высеваемости возбудителей. Серологические исследования прово­дятся реакцией непрямой гемагглютинапии в макрообъемном или микро­объемном вариантах. Отечественные предприятия выпускают для РНГА три диагностических препарата: диагностикум псев­дотуберкулезный эритроцитарный антигенный сухой, диагностикум кишечноиерсиниозный эритроцитарный антигенный сухой (серовар 03) и такой же диагностикум серовара 09. РНГА ставят по методике, изложенной в наставлениях к препаратам. Псевдотуберкулезный диагностикум обеспечи­вает выявление антител ко всем сероварам этого микроорганизма. Кишечноиерсиниозные диагностикумы включают серовароспецифические антите­ла. Диагностически достоверным является 4-кратный и более прирост уров­ня антител. В отдельных случаях (невозможность взятия парных сыворо­ток, обследование больного в поздние сроки и т. п.) при наличии четких клинических, эпидемиологических и других данных допускается использо­вание минимального условно-диагностического титра, который при псевдотуберкулезе и кишечном иерсиниозе равен 1: 160 - 1: 200.

В связи с относительным перекрестным иммунитетом при псевдотуберкулезе и кишечном иерсиниозе в сомнительных случаях (низкие титры ан­тител с одним диагностикумом при клинике иерсиониоза) рекомендуется проверять парные сыворотки параллельно с кишечноиерсиниозными (03 и 09) и псевдоту­бер­ку­лез­ными диагностикумами для выявления типа доми­нирующих антител. При положительной реакции с кишечноиерсиниозным диагностикумом серовара 09 и сомнительной клинической картине кишеч­ного иерсиниоза целесообразно провести серологическое исследование на бруцеллез ввиду антигенных связей этих бактерий.

В связи с отсутствием выпуска стандартных диагностикумов для реак­ции агглютинации и серовароспецифичности реакции применение ее при псевдотуберкулезе и кишечном иерсиниозе ограничено. Наиболее целесо­образно ее использовать для подтверждения этиологической значимости выделенных бактерий иерсиния энтероколитика (при отсутствии диагностикума для РНГА). Диагностикум из аутоштамма иерсиний применяют в виде живой или формалинизированной культуры. Линейную реакцию аг­глютинации с парными сыворотками ставят по общепринятой методике. Диагностически значимым является 4-кратное нарастание антител. При ис­следовании только одной сыворотки минимальным условно-диагностиче­ским титром считается 1:160 - 1:200.

При диарейных заболеваниях, вызванных условно патогенными энте-робактериями, серологические исследования проводятся с целью подтвер­ждения этиологической значимости выделенных бактерий. Аутоштаммы этих бактерий используются как диагностикумы в линейной реакции аг­глютинации с парными сыворотками больных. Диагностическое значение имеет двукратное и более нарастание титра антител. При исследовании одной сыворотки (при невозможности получить парные сыворотки) счи­тать ориентировочными диагностическими титрами антител: для клебсиелл 1:16 (к капсульному антигену), для протея и цитробактер 1:10 - 1:20 (к О-антигену, кипяченой культуре) и 1:80 - 1:160 (к Н-антигену, живой культуре). Отрицательный результат серологических исследо­ваний не яв­ляется безусловным отрицанием этиологической роли бактерии, так как в ряде случаев серологических сдвигов может не быть.

Серодиагностика вирусных диарей проводится в соответствии с реко­мендациями, изложенными в Приложении №2.

Перспективным направлением повышения эффективности серологиче­ской диагностики диарейных заболеваний является иммуноферментный ме­тод, обладающий высокой чувствительностью. Он будет внедряться по ме­ре разработки и выпуска отечественных диагностических препаратов.

ПРИЛОЖЕНИЕ №7

Дата добавления: 2015-08-26 | Просмотры: 1348 | Нарушение авторских прав