АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология
|
СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ДИАРЕЙНЫХ ЗАБОЛЕВАНИИ
Серологические исследования при большинстве диарейных инфекций имеют вспомогательное значение.Они предназначены для подтверждения клинического диагноза при получении отрицательного результата бактериологического или вирусологического исследования на патогенные микроорганизмы или обоснования этиологической значимости выделенных условно патогенных бактерий.
Для исследования необходимы парные сыворотки, взятые в динамике заболевания. Первую сыворотку следует брать в начале болезни (при поступлении больного в госпиталь, вторую - на 7 - 10-е сутки). Для получения сыворотки кровь берут натощак из локтевой вены или уколом из пальца.
Кровь из вены в количестве 5 - 6 мл вносят в стерильную пробирку (лучше центрифужную), которую тотчас после взятия ставят на 0,5 - 1 ч в термостат при 37 0С. Образовавшийся кровяной сгусток отделяют от стенок стерильной стеклянной палочкой, после чего оставляют на 18 - 20 ч в прохладном месте (4 - 10 0С). Отстоявшуюся сыворотку переносят в другую стерильную пробирку при помощи пастеровской пипетки с резиновым баллоном. При попадании в сыворотку примеси эритроцитов ее центрифугируют и сливают с осадка. Сыворотка может оставаться на сгустке не более 48 ч после взятия крови; сыворотка с гемолизированной кровью непригодна.
Сыворотка (без примеси эритроцитов) может храниться в стерильных условиях при температуре 4 - 10 0С до 1 мес. При необходимости сохранить сыворотку до 2 - 3 мес ее следует заморозить при температуре от -20 до - 70 0С (хранить, избегая оттаивания) или консервировать мертиолятом в конечной концентрации 1: 10000.
Из пальца кровь берут мерной пипеткой в количестве 0,1 - 0,2 мл и вносят в стерильную пробирку, содержащую 0,9 мл или 1,8 мл стерильного 0,85 % раствора натрия хлорида (с добавлением 0,25 % цитрата натрия), что соответствует разведению сывороток 1: 10. Для осаждения форменных элементов полученную взвесь центрифугируют или оставляют в холодном месте до утра. Отстоявшуюся сыворотку (разведение 1:10) переносят в стерильную пробирку и используют для последующих двукратных разведений.
В полевых условиях можно использовать метод “сухой капли”. На сложенную вдвое фильтровальную или писчую бумагу наносят 0,1 - 0,5 мл сыворотки без примеси эритроцитов. Предварительно на бумаге надписывают фамилию больного, дату взятия и количество сыворотки. Сыворотку высушивают при комнатной температуре. Бумагу с высохшей сывороткой складывают в виде пакетика для порошка, который вкладывают в конверт. В лаборатории бумагу нарезают ножницами и опускают в пробирку, куда добавляют 0,85 % раствор натрия хлорида до разведения 1:50, из которого делают последующие разведения.
Посуда для серологических реакций должна быть чистой, сухой, стерилизация ее необязательна. Пробирки, пипетки не следует помещать в растворы сулемы, карболовой кислоты, формалина, кислот и щелочей. Стекло кипятят в простой воде, пипетки затем просушивают этиловым спиртом и эфиром. Целесообразно ставить серологические реакции в микрообъемах, используя планшеты для иммунологических реакций однократного применения или планшеты титратора Такачи. Парные сыворотки должны исследоваться одновременно сразу после получения второй сыворотки.
Серологическая диагностика дизентерии проводится с помощью реакции непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА, РПГА). Отечественные предприятия выпускают для этой реакции пять видов эритроцитарных диагностикумов (из шигелл Зонне, Флекснера, Флекснера-6, дизентерии-1, дизентерии-2). Реакция ставится с парными сыворотками в соответствии с наставлением к указанным диагностическим препаратам. Днагностически достоверным показателем, подтверждающим заболеиание, является увеличение титра антител не менее чем в 8 раз. Установление этиологического диагноза острой дизентерии только на основании 4-кратного нарастания титра антител или исследования сыворотки, взятой однократно не ранее 5 - 6-го дня болезни, может приводить к диагностическим ошибкам. Оценивают результаты РНГА в таких случаях с учетом эпидемической обстановки, формы и сроков болезни, при этом титр однократно взятых сывороток должен быть не менее 1: 400. В виду недостаточной чувствительности и специфичности нецелесообразно использовать для серодиагностики дизентерии реакцию агглютинации.
Для серологической диагностики сальмонеллеза применяют РНГА и реакцию агглютинации. Для РНГА выпускается комплексный сальмонеллезный эритроцитарный О-диагностикум (О-1, 2, 4, 6, 7, 8, 9, 3, 10, 12) - для основных серогрупп А, В, C1, C2, D, E, и эрнтроцитарные О-диагностикумы - для отдельных серогрупп: А (О-1, 2, 12), В (О-1, 4, 12), C1 (О-6, 7), С2 (О-6, 8), D (О-1, 9, 12), E (О-3, 10). Реакция с парными сыворотками ставится в соответствии с наставлением к препаратам вначале с комплексным сальмонеллезным эритроцитарным О-диагностикумом. При ее положительном результате ставят РНГА раздельно с эритроцитарными О-диагностикумами групп А, В, C1, С2, D, Е. Диагностическим титром в РНГА является 1: 200. Нарастание титра антител в динамике в 4 раза и более подтверждает диагностическую значимость реакции. При перекрестных реакциях с групповыми эритроцитарными О-диагностикумами рекомендуется постановка реакции агглютинации с сальмонеллезными Н-монодиагностикумами. Для постановки реакции агглютинации выпускаются: сальмонеллезные О-диагностикумы (2, 4. 7, 8, 9, 3, 10, Vi) и Н-диагностикумы (a, d, с, b, i, r, gm, lv, eh, 1,2; 1,5); диагностикумы из сальмонелл (тифимуриум, холерасуис, энетритидис, ньюпорт, тифи О, тифи ОН, паратифа А, паратифа В). Постановка линейной реакции агглютинации, ее учет и оценка проводятся в соответствии с наставлениями к препаратам. При отсутствии стандартных бактериальных диагностикумов можно использовать в этом качестве живые или убитые штаммы сальмонелл, имеющие типичную антигенную характеристику (Таблица №7 Приложение №4).
Для серологической диагностики эшерихиозов можно применять РНГА, особенно для выявления антител к липополисахаридам ЭГКП (О157, О26, О103, О111, О145). Однако диагностические препараты для этой реакции не производят. Реакцию агглютинации использовать для серодиагностики эшерихиозов не следует ввиду ее недостаточной чувствительности.
На современном этапе серологические исследования являются основным методом этиологической диагностики псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза, так как бактериологический метод длителен и не обеспечивает хорошей высеваемости возбудителей. Серологические исследования проводятся реакцией непрямой гемагглютинапии в макрообъемном или микрообъемном вариантах. Отечественные предприятия выпускают для РНГА три диагностических препарата: диагностикум псевдотуберкулезный эритроцитарный антигенный сухой, диагностикум кишечноиерсиниозный эритроцитарный антигенный сухой (серовар 03) и такой же диагностикум серовара 09. РНГА ставят по методике, изложенной в наставлениях к препаратам. Псевдотуберкулезный диагностикум обеспечивает выявление антител ко всем сероварам этого микроорганизма. Кишечноиерсиниозные диагностикумы включают серовароспецифические антитела. Диагностически достоверным является 4-кратный и более прирост уровня антител. В отдельных случаях (невозможность взятия парных сывороток, обследование больного в поздние сроки и т. п.) при наличии четких клинических, эпидемиологических и других данных допускается использование минимального условно-диагностического титра, который при псевдотуберкулезе и кишечном иерсиниозе равен 1: 160 - 1: 200.
В связи с относительным перекрестным иммунитетом при псевдотуберкулезе и кишечном иерсиниозе в сомнительных случаях (низкие титры антител с одним диагностикумом при клинике иерсиониоза) рекомендуется проверять парные сыворотки параллельно с кишечноиерсиниозными (03 и 09) и псевдотуберкулезными диагностикумами для выявления типа доминирующих антител. При положительной реакции с кишечноиерсиниозным диагностикумом серовара 09 и сомнительной клинической картине кишечного иерсиниоза целесообразно провести серологическое исследование на бруцеллез ввиду антигенных связей этих бактерий.
В связи с отсутствием выпуска стандартных диагностикумов для реакции агглютинации и серовароспецифичности реакции применение ее при псевдотуберкулезе и кишечном иерсиниозе ограничено. Наиболее целесообразно ее использовать для подтверждения этиологической значимости выделенных бактерий иерсиния энтероколитика (при отсутствии диагностикума для РНГА). Диагностикум из аутоштамма иерсиний применяют в виде живой или формалинизированной культуры. Линейную реакцию агглютинации с парными сыворотками ставят по общепринятой методике. Диагностически значимым является 4-кратное нарастание антител. При исследовании только одной сыворотки минимальным условно-диагностическим титром считается 1:160 - 1:200.
При диарейных заболеваниях, вызванных условно патогенными энте-робактериями, серологические исследования проводятся с целью подтверждения этиологической значимости выделенных бактерий. Аутоштаммы этих бактерий используются как диагностикумы в линейной реакции агглютинации с парными сыворотками больных. Диагностическое значение имеет двукратное и более нарастание титра антител. При исследовании одной сыворотки (при невозможности получить парные сыворотки) считать ориентировочными диагностическими титрами антител: для клебсиелл 1:16 (к капсульному антигену), для протея и цитробактер 1:10 - 1:20 (к О-антигену, кипяченой культуре) и 1:80 - 1:160 (к Н-антигену, живой культуре). Отрицательный результат серологических исследований не является безусловным отрицанием этиологической роли бактерии, так как в ряде случаев серологических сдвигов может не быть.
Серодиагностика вирусных диарей проводится в соответствии с рекомендациями, изложенными в Приложении №2.
Перспективным направлением повышения эффективности серологической диагностики диарейных заболеваний является иммуноферментный метод, обладающий высокой чувствительностью. Он будет внедряться по мере разработки и выпуска отечественных диагностических препаратов.
ПРИЛОЖЕНИЕ №7
Дата добавления: 2015-08-26 | Просмотры: 1339 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 | 61 | 62 |
|