Контроль питательных сред для энтеробактерий по биологическим поизателям
Бактериологическому контролю подлежат: все серии питательных сред промышленного производства; все партии сред, приготовленных в лаборатории. В качестве тест-культур бактерий следует использовать типовые штаммы, полученные из музея культур Государственного НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л. А. Тарасевича, или местные штаммы энтеробактерий, типичные по всем признакам, обязательно в гладкой форме. Тест-культуры хранят в лиофилизированном состоянии или в столбике полужидкого (0,3 %) питательного агара под слоем стерильного вазелинового масла. Перед использованием культуры высевают на питательный агар, затем на скошенный питательный агар или питательный бульон. Для получения необходимых посевных доз тест-культуру десятикратио разводят стерильным 0,85 % раствором натрия хлорида из исходной взвеси агаровой культуры концентрацией 1 млрд бактерий в 1 мл (концентрацию бактерий определяют по оптическому стандарту мутности ГИСК им. Тарасевича) или из суточной бульонной культуры, исходя из ее М-концентрации в миллионах бактерий в 1 мл среды (сальмонелла тифа - 250 - 300, сальмонелла паратифа В и прочие сальмонеллы - 400 - 600, шигеллы Зонне - 300 - 400, шигеллы Флекснера - 700 - 800, эшерихии - 500 - 900).
Контроль сред обогащения (селенитовой, магниевой, Мюллера, Кауфмана) проводят по следующим показателям: чувствительности для патогенных энтеробактерий, ингибиторному действию на сапрофитную микрофлору.
Для определения ч у в с т в и т е л ь н о с т и с р е д ы готовят десятикратные разведения тест-культур сальмонелл и шигелл так, чтобы получить три рабочих разведения каждой культуры с расчетной концентрацией 1000, 100 и 10 бактерий в 1 мл. По 1 мл культуры из этих разведений вносят в пробирки, содержащие по 10 мл испытуемой среды. Одновременно из этих же разведений высевают по 0,1 мл на две чашки питательного агара (контроль посевной дозы бактерий). Посевы выращивают при 37 0С 24ч, после чего учитывают результаты.
Среда считается вполне удовлетворительной, если посев единичных клеток дал помутнение среды через 24 ч; удовлетворительной, если посев десятков клеток дал помутнение среды через 24 ч; удовлетворительной, если посев десятков клеток дал помутнение среды через 24 ч, а посев единичных клеток - помутнение среды через 48 ч; непригодной, если посев единичных и десятков клеток не дает помутнения среды.
Для определения и н г и б и т о р н о й с п о с о б н о с т и среды используют суточные бульонные культуры 10 штаммов эшерихий, выделенных от разных лиц при текущей работе лаборатории. Каждую культуру эшерихий засевают по 0,1 мл в 10 мл испытуемой среды (посевная доза - десятки миллионов бактерий). Инкубируют посевы при 37 0С 24 ч.
Ингибиторное действие среды считается удовлетворительным, если большая часть штаммовэшерихий (6 - 7 и более) не растет (прозрачные пробирки) либо дает едва заметный рост (очень слабое помутнение).
Контроль бактоагара Плоскирева включает оценку ингибирующих и дифференцирующих свойства среды.
Из тест-культур сальмонелл, шигелл делают разведения до расчетной концентрации 1000 бактерий в 1 мл, из тест-культуры эшерихий - до 100000 бактерий в 1 мл. Высевают по 0,1 мл взвеси сальмонелл, шигелл, эшерихий на две чашки с бактоагаром Плоскирева и две чашки с питательным агаром (контроль) для каждого вида бактерий раздельно. Высевают смесь бактерий: 0,1 мл сальмонелл и 0,1 мл эшерихий на две чашки бактоагара Плоскирева; 0,1 мл шигелл и 0,1 мл эшерихий на две чашки бактоагара Плоскирева. Посевы инкубируют при 37 0С 24 ч, после чего подсчитывают колонии (среднюю арифметическую с двух чашек), определяют кратность ингибирующего действия по отношению к контрольной среде, изучают дифференцирующие признаки колоний.
Среда считается годной к применению при следующих показателях: рост патогенных бактерий (шигелл, сальмонелл) угнетается не более чем в 5 раз; рост эшерихий угнетается не менее чем в 100 раз; при посеве смеси 100 патогенных бактерий и 10 000 эшерихийлегко выделяются и дифференцируются колонии патогенных бактерий; сальмонеллы и шигеллы должны расти в виде бесцветных сочных колоний в гладкой форме диаметром 1 - 2 мм, колонии эшерихий должны иметь брусничный цвет.
Контроль висмут-сульфит-агара проводят аналогично испытанию бактоагара Плоскирева. Особенности: тест-культуру эшерихий разводят до концентрации 1000 бактерий в 1 мл; учет результатов проводят через 24 ч и 48 ч.
Среда считается годной к применению при наличии роста тест-культур сальмонелл и окраске колоний сальмонелл в черный цвет.
Контроль среды Эндо включает оценку ингибирующих и дифференцирующих свойств среды.
Из тест-культур эшерихий, сальмонелл, шигелл делают разведения до расчетной концентрации 1000 бактерий в 1 мл. Высевают по 0,1 мл взвеси бактерий каждого вида на 3 чашки среды Эндо и 3 чашки питательного агара, т. е. на каждый вид бактерий 6 чашек со средой. Высевают смесь бактерий: 0,1 мл эшерихий и 0,1 мл сальмонелл на одну чашку среды Эндо, 0,1 мл эшерихий и 0,1 мл шигелл на одиу чашку среды Эндо. Посевы инкубируют при 37 0С 24 ч, после чего подсчитывают количество колоний (среднюю арифметическую с трех чашек), определяют ингибирующее действие относительно питательного агара, изучают дифференцирующие признаки колоний.
Среда считается пригодной к употреблению, если на ней растет не менее 30 % засеянных бактерий (количество колоний бактерий каждого испытуемого вида должно быть на среде Эндо не менее 30, если на питательном arape их 100). Колонии шигелл, сальмоиелл должны быть бесцветные, сочные; колонии лактозопозитивных эшерихий - красные с металлическим блеском, сочные. При посеве смеси бактерий колонии шигелл и сальмонелл должны четко отличаться от колоний эшерихий.
Контроль агара с эозин-метиленовым синим (Левина) проводится аналогично контролю среды Эндо.
Среда считается пригодной к употреблению при наличии роста не менее 30 % засеянных бактерий (эшерихий, шигелл, сальмонелл). Колонии шигелл, сальмонелл должны быть бесцветными, прозрачными, колонии эшерихий — окрашенными в синий или черный цвет.
Контроль сред для идентификации бактерий включает оценку дифференцирующих свойств питательных сред. В качестве тест-культур используют штаммы бактерий с точно установленной видовой принадлежностью и заведомо обладающие четко выраженными дифференцирующими свойствами, по которым ведется исследование. Для посевов применяют суточные агаровые культуры бактерий. Методика посева, режим и время выращивания культур соответствуют требованиям к конкретным испытуемым питательным средам.
Питательная среда считается пригодной к работе, если при испытании четко проявляются все ее дифференцирующие свойства.
ПРИЛОЖЕНИЕ №6
Дата добавления: 2015-08-26 | Просмотры: 1471 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 | 61 | 62 |
|