АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Контроль питательных сред для энтеробактерий по биологическим поизателям

Бактериологическому контролю подлежат: все серии питательных сред промышленного производства; все партии сред, приготовленных в лабора­тории. В качестве тест-культур бактерий следует использовать типовые штаммы, полученные из музея культур Государственного НИИ стандарти­зации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л. А. Тарасевича, или местные штаммы энтеробактерий, типичные по всем призна­кам, обязательно в гладкой форме. Тест-культуры хранят в лиофилизированном состоянии или в столбике полужидкого (0,3 %) питательного агара под слоем стерильного вазелинового масла. Перед использованием культу­ры высевают на питательный агар, затем на скошенный питательный агар или питательный бульон. Для получения необходимых посевных доз тест-культуру десятикратио разводят стерильным 0,85 % раствором натрия хло­рида из исходной взвеси агаровой культуры концентрацией 1 млрд бакте­рий в 1 мл (концентрацию бактерий определяют по оптическому стандарту мутности ГИСК им. Тарасевича) или из суточной бульонной культуры, ис­ходя из ее М-концентрации в миллионах бактерий в 1 мл среды (сальмонелла тифа - 250 - 300, сальмонелла паратифа В и прочие сальмонеллы - 400 - 600, шигеллы Зонне - 300 - 400, шигеллы Флекснера - 700 - 800, эшерихии - 500 - 900).

Контроль сред обогащения (селенитовой, магниевой, Мюллера, Кауф­мана) проводят по следующим показателям: чувствительности для пато­генных энтеробактерий, ингибиторному действию на сапрофитную микро­флору.

Для определения ч у в с т в и т е л ь н о с т и с р е д ы готовят десяти­кратные разведения тест-культур сальмонелл и шигелл так, чтобы полу­чить три рабочих разведения каждой культуры с расчетной концентрацией 1000, 100 и 10 бактерий в 1 мл. По 1 мл культуры из этих разведений вно­сят в пробирки, содержащие по 10 мл испытуемой среды. Одновременно из этих же разведений высевают по 0,1 мл на две чашки питательного ага­ра (контроль посевной дозы бактерий). Посевы выращивают при 37 ⁰С 24ч, после чего учитывают результаты.

Среда считается вполне удовлетворительной, если посев единичных клеток дал помутнение среды через 24 ч; удовлетворительной, если посев десятков клеток дал помутнение среды через 24 ч; удовлетворительной, если посев десятков клеток дал помутнение среды через 24 ч, а посев еди­ничных клеток - помутнение среды через 48 ч; непригодной, если посев единичных и десятков клеток не дает помутнения среды.

Для определения и н г и б и т о р н о й с п о с о б н о с т и среды ис­пользуют суточные бульонные культуры 10 штаммов эшерихий, выделен­ных от разных лиц при текущей работе лаборатории. Каждую культуру эшерихий засевают по 0,1 мл в 10 мл испытуемой среды (посевная доза - десятки миллионов бактерий). Инкубируют посевы при 37 ⁰С 24 ч.

Ингибиторное действие среды считается удовлетворительным, если большая часть штаммовэшерихий (6 - 7 и более) не растет (прозрачные пробирки) либо дает едва заметный рост (очень слабое помутнение).

Контроль бактоагара Плоскирева включает оценку ингибирующих и дифференцирующих свойства среды.

Из тест-культур сальмонелл, шигелл делают разведения до расчетной концентрации 1000 бактерий в 1 мл, из тест-культуры эшерихий - до 100000 бактерий в 1 мл. Высевают по 0,1 мл взвеси сальмонелл, шигелл, эшерихий на две чашки с бактоагаром Плоскирева и две чашки с пита­тельным агаром (контроль) для каждого вида бактерий раздельно. Высе­вают смесь бактерий: 0,1 мл сальмонелл и 0,1 мл эшерихий на две чашки бактоагара Плоскирева; 0,1 мл шигелл и 0,1 мл эшерихий на две чашки бактоагара Плоскирева. Посевы инкубируют при 37 ⁰С 24 ч, после чего подсчитывают колонии (среднюю арифметическую с двух чашек), опреде­ляют кратность ингибирующего действия по отношению к контрольной среде, изучают дифференцирующие признаки колоний.

Среда считается годной к применению при следующих показателях: рост патогенных бактерий (шигелл, сальмонелл) угнетается не более чем в 5 раз; рост эшерихий угнетается не менее чем в 100 раз; при посеве смеси 100 патогенных бактерий и 10 000 эшерихийлегко выделяются и дифференци­руются колонии патогенных бактерий; сальмонеллы и шигеллы должны расти в виде бесцветных сочных колоний в гладкой форме диаметром 1 - 2 мм, колонии эшерихий должны иметь брусничный цвет.

Контроль висмут-сульфит-агара проводят аналогично испытанию бактоагара Плоскирева. Особенности: тест-культуру эшерихий разводят до концентрации 1000 бактерий в 1 мл; учет результатов проводят через 24 ч и 48 ч.

Среда считается годной к применению при наличии роста тест-культур сальмонелл и окраске колоний сальмонелл в черный цвет.

Контроль среды Эндо включает оценку ингибирующих и дифференци­рующих свойств среды.

Из тест-культур эшерихий, сальмонелл, шигелл делают разведения до расчетной концентрации 1000 бактерий в 1 мл. Высевают по 0,1 мл взвеси бактерий каждого вида на 3 чашки среды Эндо и 3 чашки питательного агара, т. е. на каждый вид бактерий 6 чашек со средой. Высевают смесь бактерий: 0,1 мл эшерихий и 0,1 мл сальмонелл на одну чашку среды Эн­до, 0,1 мл эшерихий и 0,1 мл шигелл на одиу чашку среды Эндо. Посевы инкубируют при 37 ⁰С 24 ч, после чего подсчитывают количество колоний (среднюю арифметическую с трех чашек), определяют ингибирующее дей­ствие относительно питательного агара, изучают дифференцирующие при­знаки колоний.

Среда считается пригодной к употреблению, если на ней растет не ме­нее 30 % засеянных бактерий (количество колоний бактерий каждого испы­туемого вида должно быть на среде Эндо не менее 30, если на питатель­ном arape их 100). Колонии шигелл, сальмоиелл должны быть бесцветные, сочные; колонии лактозопозитивных эшерихий - красные с металлическим блеском, сочные. При посеве смеси бактерий колонии шигелл и сальмонелл должны четко отличаться от колоний эшерихий.

Контроль агара с эозин-метиленовым синим (Левина) проводится ана­логично контролю среды Эндо.

Среда считается пригодной к употреблению при наличии роста не ме­нее 30 % засеянных бактерий (эшерихий, шигелл, сальмонелл). Колонии шигелл, сальмонелл должны быть бесцветными, прозрачными, колонии эше­рихий — окрашенными в синий или черный цвет.

Контроль сред для идентификации бактерий включает оценку диффе­ренцирующих свойств питательных сред. В качестве тест-культур исполь­зуют штаммы бактерий с точно установленной видовой принадлежностью и заведомо обладающие четко выраженными дифференцирующими свой­ствами, по которым ведется исследование. Для посевов применяют суточ­ные агаровые культуры бактерий. Методика посева, режим и время выра­щивания культур соответствуют требованиям к конкретным испытуемым питательным средам.

Питательная среда считается пригодной к работе, если при испытании четко проявляются все ее дифференцирующие свойства.

ПРИЛОЖЕНИЕ №6

Дата добавления: 2015-08-26 | Просмотры: 1498 | Нарушение авторских прав