АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Среда для определения b-галактозидазы

1. О-нитрофенил-b-Д-галактопиранозид (ONPG) в количестве 1 г ра­створяют в 100 мл стерильной дистиллированной воды при слабом подо­гревании. Раствор хранят в холодильнике и используют по мере надоб­ности.

2. Сухой питательный агар 1,3 г растворяют в 100 мл дистиллирован­ной воды, кипятят 1 - 2 мин, стерилизуют при 120 ⁰С 30 мин. Охлаждают до 45 – 50 ⁰С, добавляют 20 мл раствора №1, стерильно разливают в агглютинационные пробирки. Среду можно сохранять в холодильнике 2 - 3 мес. Посев производят уколом до дна пробирки, инкубируют при 37 ⁰С 18 - 24 ч. При положительной реакции среда окрашивается в желтый цвет.

Среда с малонатом натрия. Дрожжевого экстракта - 1г, (NH₄)₂S0₄ - 2 г, K₂HP0₄ - 0,6 г, KH₂PO₄ - 0,4 г, хлорида натрия - 2 г, малоната нат­рия - 3 г; глюкозы - 0,25 г, дистиллированной воды - до 1л, 0,2 % водно­го раствора бромтимолового синего - 12 мл. При подогревании раство­ряют в дистиллированной воде ингредиенты среды, фильтруют, добавляют индикатор. Устанавливают рН 6,7. Среду разливают в стерильные пробир­ки и стерилизуют при 120 ⁰С 15 мин.

Среда для определения нитратредуктазы и методика теста (по Ю.Н. Касаткину, 1960, в модификации Е.П. Сиволодского, 1987). В 100 мл дистиллированной воды растворяют 1 г пептона, 0,5 г хлоида натрия, 0,1 г азотнокислого калия (или азотнокислого натрия), стерилизуют при 121 ⁰С 30 минут.

П о с т а н о в к а т е с т а. Среду с нитратом вносят по 0,1 мл в лунку планшета, засевают одной петлей испытуемой агаровой культуры, инкубируют при 37^ОС в течение 3 - 4 часов. Вносят в опытную и контрольную (без культуры бактерий) лунки по 0,05 мл 0,2 % раствора риванола, затем по 0,05 мл 10 % раствора соляной кислоты. В присутствии нитритов (продукты восстановления нитратов нитратредуктазой) среда в лунке окрашивается в ярко-вишневый цвет. В контроле и при отрицательном результате теста cреда в лунке сохраняет желтую окраску.

Среда “Клебсиелла 5АСК” для выделения и идентификации клебсиелл (по Е.П. Сиволодскому, 1988). Приготовление среды: во флакон c 200 мл горячего расплавленного стерильного питательного агара вносят 1 г 5-аминосалициловой кислоты, 2 г L-арабинозы, перемешивают, добавляют 0,8 мл 1,6 % спиртового раствора бромтимолового синего и 1 N раствор NaOH до появления зеленой окраски среды, разливают среду в стерильные чашки Петри. На чашки со средой засывают исследуемый материал или культуры, инкубируют при 37 ⁰С в течние 24 часов. Идентифицируют клебсиеллы по наличию зон темно-коричневой окраски среды вокруг выросших колоний или газона культыр. Хромогенную реакцию дают виды К. pneumoniae, K. oxytoca, K. mobilis.

Комплекты коммерческих тест-систем для биохмичекой идентификации энтеробактерий: “Рапид-энтеро” (5 часов), НИИЭМ им. Пастера, Санкт-Петербург; ПБДЕ (18 часов), Нижний Новгород; ММТ Е1 и Е2, Ставрополь, а также комплекты зарубежных фирм.

Среда с мочевиной по Преусу. Состав: бульон Хоттингера - 1 л, агар-агар - 15 г, глюкоза - 5 г, мочевина (50 % водный раствор) - 20 мл, бромтимоловый синий (0,2 % водный раствор) - 12 мл. Растворяют агар в бульоне при подогревании, фильтруют, устанавливают рН 6,9 - 7,0. Стери­лизуют при 120 ⁰С 20 мин. Добавляют к стерильному питательному агару глюкозу, мочевину, индикатор. Стерилизуют текучим паром 15 мин, ска­шивают. Цвет готовой среды - оливковый. При ферментации мочевины ис­следуемыми бактериями среда приобретает синий цвет.

Реактив Ковача и методика теста на индол. Состав: парадиметилами-нобензальдегид - 5 г, амиловый спирт - 75 мл, кислота соляная концен­трированная - 25 мл. Растворить альдегид в спирте, затем медленно до­бавить кислоту. Хранить в темном флаконе с притертой пробкой. Методика теста: к суточной бульонной культуре бактерии (на 1 % пептонной воде, бульоне Хоттингера, среде с триптофаном) добавляют 0,3 - 0,5 мл реакти­ва Ковача, встряхивают. На поверхность среды всплывает слой реактива. При наличии индола слой окрашен в яркий красный цвет (окраска долго сохраняется), при отсутствии индола реактив имеет исходную желтую окраску.

Индикаторная бумажка на индол. Смешивают: парадиметиламинобензальдегид - 5 г, этиловый спирт 96 ⁰С - 50 мл, фосфорную кислоту (очищенную концентрированную) - 10 мл. Затем дают раствориться порошку. Полученной тепловатой жидкостью смачивают листы фильтровальной бу­маги, высушивают, нарезают узкими полосками. Цвет бумажки желтый. При наличии индола цвет меияется от сиренево-розового до интенсивно-малинового. Появление других цветов на индикаторной бумажке не учи­тывают. Индикаторную бумажку ва индол следует использовать только на средах без углеводов.

Дата добавления: 2015-08-26 | Просмотры: 926 | Нарушение авторских прав