АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Среда для определения b-галактозидазы

Прочитайте:
  1. A. местоположение, площадь и границы, объем, размер (высота, ширина, длина), форма, ландшафт, залежи ископаемых, тип почвы, физические характеристики, внешняя среда
  2. II. Методы определения групп крови
  3. Аускультация живота беременной, сердцебиения плода. Состояние внутриутробного плода. Методы определения жизнедеятельности плода
  4. Б) Экспресс метод определения Rh-фактора на плоскости
  5. Базовые понятия и определения
  6. Бессклетные рентгеновские снимки используют для определения расположения неметаллического (стекло, дерево) инородного тела. УЗИ-сканирование также полезно при диагностике.
  7. Биологические и физико-химические принципы определения чувствительности антибиотиков методом диффузии в агар.
  8. БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВЕЩЕСТВ СО СВОЙСТВАМИ ЭНДОГЕННЫХ ТОКСИНОВ. УРОВНИ ДИАГНОСТИКИ
  9. В-лимфоциты. Характеристика. Основные маркёры. В-клеточный-рецептор. Методы определения содержания и функциональной активности В-лимфоцитов.
  10. Визуальный микрометод определения агрегации тромбоцитов

1. О-нитрофенил-b-Д-галактопиранозид (ONPG) в количестве 1 г ра­створяют в 100 мл стерильной дистиллированной воды при слабом подо­гревании. Раствор хранят в холодильнике и используют по мере надоб­ности.

2. Сухой питательный агар 1,3 г растворяют в 100 мл дистиллирован­ной воды, кипятят 1 - 2 мин, стерилизуют при 120 0С 30 мин. Охлаждают до 45 – 50 0С, добавляют 20 мл раствора №1, стерильно разливают в агглютинационные пробирки. Среду можно сохранять в холодильнике 2 - 3 мес. Посев производят уколом до дна пробирки, инкубируют при 37 0С 18 - 24 ч. При положительной реакции среда окрашивается в желтый цвет.

Среда с малонатом натрия. Дрожжевого экстракта - 1г, (NH4)2S04 - 2 г, K2HP04 - 0,6 г, KH2PO4 - 0,4 г, хлорида натрия - 2 г, малоната нат­рия - 3 г; глюкозы - 0,25 г, дистиллированной воды - до 1л, 0,2 % водно­го раствора бромтимолового синего - 12 мл. При подогревании раство­ряют в дистиллированной воде ингредиенты среды, фильтруют, добавляют индикатор. Устанавливают рН 6,7. Среду разливают в стерильные пробир­ки и стерилизуют при 120 0С 15 мин.

Среда для определения нитратредуктазы и методика теста (по Ю.Н. Касаткину, 1960, в модификации Е.П. Сиволодского, 1987). В 100 мл дистиллированной воды растворяют 1 г пептона, 0,5 г хлоида натрия, 0,1 г азотнокислого калия (или азотнокислого натрия), стерилизуют при 121 0С 30 минут.

П о с т а н о в к а т е с т а. Среду с нитратом вносят по 0,1 мл в лунку планшета, засевают одной петлей испытуемой агаровой культуры, инкубируют при 37ОС в течение 3 - 4 часов. Вносят в опытную и контрольную (без культуры бактерий) лунки по 0,05 мл 0,2 % раствора риванола, затем по 0,05 мл 10 % раствора соляной кислоты. В присутствии нитритов (продукты восстановления нитратов нитратредуктазой) среда в лунке окрашивается в ярко-вишневый цвет. В контроле и при отрицательном результате теста cреда в лунке сохраняет желтую окраску.

Среда “Клебсиелла 5АСК” для выделения и идентификации клебсиелл (по Е.П. Сиволодскому, 1988). Приготовление среды: во флакон c 200 мл горячего расплавленного стерильного питательного агара вносят 1 г 5-аминосалициловой кислоты, 2 г L-арабинозы, перемешивают, добавляют 0,8 мл 1,6 % спиртового раствора бромтимолового синего и 1 N раствор NaOH до появления зеленой окраски среды, разливают среду в стерильные чашки Петри. На чашки со средой засывают исследуемый материал или культуры, инкубируют при 37 0С в течние 24 часов. Идентифицируют клебсиеллы по наличию зон темно-коричневой окраски среды вокруг выросших колоний или газона культыр. Хромогенную реакцию дают виды К. pneumoniae, K. oxytoca, K. mobilis.

Комплекты коммерческих тест-систем для биохмичекой идентификации энтеробактерий: “Рапид-энтеро” (5 часов), НИИЭМ им. Пастера, Санкт-Петербург; ПБДЕ (18 часов), Нижний Новгород; ММТ Е1 и Е2, Ставрополь, а также комплекты зарубежных фирм.

Среда с мочевиной по Преусу. Состав: бульон Хоттингера - 1 л, агар-агар - 15 г, глюкоза - 5 г, мочевина (50 % водный раствор) - 20 мл, бромтимоловый синий (0,2 % водный раствор) - 12 мл. Растворяют агар в бульоне при подогревании, фильтруют, устанавливают рН 6,9 - 7,0. Стери­лизуют при 120 0С 20 мин. Добавляют к стерильному питательному агару глюкозу, мочевину, индикатор. Стерилизуют текучим паром 15 мин, ска­шивают. Цвет готовой среды - оливковый. При ферментации мочевины ис­следуемыми бактериями среда приобретает синий цвет.

Реактив Ковача и методика теста на индол. Состав: парадиметилами-нобензальдегид - 5 г, амиловый спирт - 75 мл, кислота соляная концен­трированная - 25 мл. Растворить альдегид в спирте, затем медленно до­бавить кислоту. Хранить в темном флаконе с притертой пробкой. Методика теста: к суточной бульонной культуре бактерии (на 1 % пептонной воде, бульоне Хоттингера, среде с триптофаном) добавляют 0,3 - 0,5 мл реакти­ва Ковача, встряхивают. На поверхность среды всплывает слой реактива. При наличии индола слой окрашен в яркий красный цвет (окраска долго сохраняется), при отсутствии индола реактив имеет исходную желтую окраску.

Индикаторная бумажка на индол. Смешивают: парадиметиламинобензальдегид - 5 г, этиловый спирт 96 0С - 50 мл, фосфорную кислоту (очищенную концентрированную) - 10 мл. Затем дают раствориться порошку. Полученной тепловатой жидкостью смачивают листы фильтровальной бу­маги, высушивают, нарезают узкими полосками. Цвет бумажки желтый. При наличии индола цвет меияется от сиренево-розового до интенсивно-малинового. Появление других цветов на индикаторной бумажке не учи­тывают. Индикаторную бумажку ва индол следует использовать только на средах без углеводов.

 


Дата добавления: 2015-08-26 | Просмотры: 993 | Нарушение авторских прав



1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 | 61 | 62 |



При использовании материала ссылка на сайт medlec.org обязательна! (0.003 сек.)