 |
|
АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология |
Лабораторная диагностика. Исследуемый материал:Исследуемый материал: Зависит от формы инфекции (при легочной – мокрота, при других – гной, ликвор, моча). Методы диагностики: В исследуемом материале очень мало возбудителей, поэтому проводят обогащение материала (концентрацию возбудителя в меньшем объеме исследуемого материала): · Метод гомогенизации и центрифугирования в присутствии NaOH · Метод флотации с ксилолом 1. Экспресс-диагностика ПЦР 2. Микроскопический метод Окраска нативного исследуемого материала по Цилю-Нильсену (кислотоустойчивые бактерии – красные, кислотонеустойчивые – синие). Окраска нативного и обогащенного материала люминесцирующими красителями (аурамином) (патогенные микобактерии – золотисто-оранжевые, атипичные формы – зеленые, непатогннные – грязно-серые). Обогащение исследуемого материала проводится центрифугированием (осадок микроскопируется) или методом флотации. Обнаружение в мазках микобактерий дает основание для постановки предварительного диагноза. 3. Бактериологический метод Является обязательным. I этап: посев обогащенного исследуемого материала, предварительно обработанного кислотой и нейтрализованного щелочью (т.к. микобактерии кислотоустойчивы) на питательные среды: среда Сотона (солевой раствор, глицерин, аспарагин) – рост в виде морщинистой пленки с ароматическим запахом; среда Левенштейна-Йенсена (суспензия свежих яиц, аспарагин, картофельная мука, глицерин); среда Финна (источник азота – глютамат натрия); среда «Новая» (источник азота – гликокол). В плотные питательные среды добавляют малахитовую зелень для подавления роста сопутствующей микрофлоры, поэтому среды имеют нежно-зеленую окраску. Инкубация при 37°С до 4 мес., первый учет роста через 14 – 25 дней – для M. tuberculosis, через 24 – 40 дней – для M. bovis. II этап: изучение выросшей культуры по культуральным (вирулентные культуры микобактерий растут в виде R-форм с образованием слабого розовато-желтого пигмента, атипичные микобактерии и сапрофиты – в виде R-форм с образованием ярко-розового или ярко-желтого пигмента), морфологическим (наличие у патогенных микобактерий корд-фактора) и тинкториальным свойствам. Пересев на скошенный агар для выделения чистой культуры не производим, т.к. культура уже чистая (все некислотоустойчивые бактерии погибли при обработке исследуемого материала кислотой). III этап: идентификация чистой культуры · по биохимическим свойствам: 1. Тест, позволяющий отличить M. tuberculosis и M. bovis от других микобактерий: если культуры прогреть при 68°С, то каталазная активность M. tuberculosis и M. bovis теряется, в отличие от других микобактерий; 2. Тест, позволяющий отличить M. tuberculosis от M. bovis: ниациновая проба (ниациновый тест, проба Кона) – M. tuberculosis в отличие от M. bovis способна синтезировать никотиновую кислоту (в среду Соттона добавляют 1 мл 5% хлорамина и 1 мл цианистого калия, в присутствии никотиновой кислоты образуется ниацин – желтое окрашивание среды); 3. Тест, позволяющий отличить M. tuberculosis от M. bovis: M. tuberculosis в отличие от M. bovis способна восстанавливать нитраты в нитриты. 4. Биологический метод Производят заражение лабораторных животных исследуемым материалом от больного (к M. tuberculosis чувствительны морские свинки; к M. bovis – кролики). Учет через 3 – 4 месяца. 5. Метод кожно-аллергических проб Проба Манту (в основе лежит гиперчувствительность замедленного типа – антителнезависимая). Проводится внутрикожно с аллергеном (туберкулин). Туберкулин – очищенный белок из микобактерий туберкулеза – ППД-Л (пурин-протеин-дериват Линниковой) в количестве 2 ЕД. Учет через 72 часа. Различают отрицательную, нормэргическую (5 – 16 мм) и гиперэргическую реакцию. Об инфицировании судят по виражу туберкулиновой пробы (учет по туберкулиновому ряду в динамике). 6. Ускоренный метод диагностики Метод Прайса (метод микрокультур). На стекло наносится обогащенный исследуемый материал, предварительно обработанный кислотой и нейтрализованный щелочью, вертикально погружается в цитратную кровь на 10 - 14 дней, затем сушится, фиксируется, окрашивается по Цилю-Нильсену. В иммерсионный микроскоп видны микобактерии в виде кос или нитей войлока, благодаря наличию у патогенных микобактерий корд-фактора. Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 639 | Нарушение авторских прав |