Лабораторная диагностика. Исследуемый материал:
Исследуемый материал:
Зависит от формы инфекции (при легочной – мокрота, при других – гной, ликвор, моча).
Методы диагностики:
В исследуемом материале очень мало возбудителей, поэтому проводят обогащение материала (концентрацию возбудителя в меньшем объеме исследуемого материала):
· Метод гомогенизации и центрифугирования в присутствии NaOH
· Метод флотации с ксилолом
1. Экспресс-диагностика
ПЦР
2. Микроскопический метод
Окраска нативного исследуемого материала по Цилю-Нильсену (кислотоустойчивые бактерии – красные, кислотонеустойчивые – синие). Окраска нативного и обогащенного материала люминесцирующими красителями (аурамином) (патогенные микобактерии – золотисто-оранжевые, атипичные формы – зеленые, непатогннные – грязно-серые). Обогащение исследуемого материала проводится центрифугированием (осадок микроскопируется) или методом флотации. Обнаружение в мазках микобактерий дает основание для постановки предварительного диагноза.
3. Бактериологический метод
Является обязательным.
I этап: посев обогащенного исследуемого материала, предварительно обработанного кислотой и нейтрализованного щелочью (т.к. микобактерии кислотоустойчивы) на питательные среды:
среда Сотона (солевой раствор, глицерин, аспарагин) – рост в виде морщинистой пленки с ароматическим запахом;
среда Левенштейна-Йенсена (суспензия свежих яиц, аспарагин, картофельная мука, глицерин);
среда Финна (источник азота – глютамат натрия);
среда «Новая» (источник азота – гликокол).
В плотные питательные среды добавляют малахитовую зелень для подавления роста сопутствующей микрофлоры, поэтому среды имеют нежно-зеленую окраску. Инкубация при 37°С до 4 мес., первый учет роста через 14 – 25 дней – для M. tuberculosis, через 24 – 40 дней – для M. bovis.
II этап: изучение выросшей культуры по культуральным (вирулентные культуры микобактерий растут в виде R-форм с образованием слабого розовато-желтого пигмента, атипичные микобактерии и сапрофиты – в виде R-форм с образованием ярко-розового или ярко-желтого пигмента), морфологическим (наличие у патогенных микобактерий корд-фактора) и тинкториальным свойствам. Пересев на скошенный агар для выделения чистой культуры не производим, т.к. культура уже чистая (все некислотоустойчивые бактерии погибли при обработке исследуемого материала кислотой).
III этап: идентификация чистой культуры
· по биохимическим свойствам:
1. Тест, позволяющий отличить M. tuberculosis и M. bovis от других микобактерий: если культуры прогреть при 68°С, то каталазная активность M. tuberculosis и M. bovis теряется, в отличие от других микобактерий;
2. Тест, позволяющий отличить M. tuberculosis от M. bovis: ниациновая проба (ниациновый тест, проба Кона) – M. tuberculosis в отличие от M. bovis способна синтезировать никотиновую кислоту (в среду Соттона добавляют 1 мл 5% хлорамина и 1 мл цианистого калия, в присутствии никотиновой кислоты образуется ниацин – желтое окрашивание среды);
3. Тест, позволяющий отличить M. tuberculosis от M. bovis: M. tuberculosis в отличие от M. bovis способна восстанавливать нитраты в нитриты.
4. Биологический метод
Производят заражение лабораторных животных исследуемым материалом от больного (к M. tuberculosis чувствительны морские свинки; к M. bovis – кролики). Учет через 3 – 4 месяца.
5. Метод кожно-аллергических проб
Проба Манту (в основе лежит гиперчувствительность замедленного типа – антителнезависимая). Проводится внутрикожно с аллергеном (туберкулин). Туберкулин – очищенный белок из микобактерий туберкулеза – ППД-Л (пурин-протеин-дериват Линниковой) в количестве 2 ЕД. Учет через 72 часа. Различают отрицательную, нормэргическую (5 – 16 мм) и гиперэргическую реакцию. Об инфицировании судят по виражу туберкулиновой пробы (учет по туберкулиновому ряду в динамике).
6. Ускоренный метод диагностики
Метод Прайса (метод микрокультур). На стекло наносится обогащенный исследуемый материал, предварительно обработанный кислотой и нейтрализованный щелочью, вертикально погружается в цитратную кровь на 10 - 14 дней, затем сушится, фиксируется, окрашивается по Цилю-Нильсену. В иммерсионный микроскоп видны микобактерии в виде кос или нитей войлока, благодаря наличию у патогенных микобактерий корд-фактора.
Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 681 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 | 61 | 62 | 63 | 64 | 65 | 66 | 67 | 68 | 69 | 70 | 71 | 72 | 73 | 74 | 75 | 76 | 77 | 78 | 79 | 80 | 81 | 82 | 83 |
|