Микроскопия препаратов крови для выявления плазмодиев проводится при большом увеличении с иммерсионным объективом 90х и окуляром 7-10х при ярком освещении. Каплю иммерсионного масла наносят на тонкое место мазка.
Pl.vivax на стадии юного трофозоита имеет вид кольца (кольцевидный трофозоит). Большая часть паразита занята крупной вакуолью, оттесняющей ядро и цитоплазму к периферии клетки (прил. 10). В цитоплазме плазмодия пигмент отсутствует. На этой возрастной стадии плазмодий занимает около 1/3 объема эритроцита.Нередко встречаются 2-3 кольца в одном эритроците. Вследствие нарушения целостности ядра плазмодия во время подсыхания мазка крови иногда в кольце видны как бы два ядра, расположенные рядом или на некотором расстоянии одно от другого.
В зрелом трофозоите, в отличие от кольцевидного, ободок цитоплазмы утолщен на стороне, противоположной ядру. В цитоплазме содержатся мелкие зерна пигмента. Зрелые трофозоиты обычно имеют неправильную амебовидную форму с одной или несколькими вакуолями. Размер их равен 1/2-2/3 диаметра эритроцита. По всей цитоплазме разбросан темно-бурый или золотисто-бурый пигмент. Зрелые трофозоиты занимают почти весь эритроцит. Они имеют круглую или овальную форму, без псевдоподий; цитоплазма без вакуоли. Пигмент у зрелых трофозоитов собирается в кучки (35-40 отдельных зернышек).
Созревание трофозоитов завершается делением их ядра. Образующийся юный шизонт имеет несколько ядер. Их число после окончания деления варьирует от 14 до 22 (обычно бывает 16-18 ядер). Иногда, если деление началось раньше, чем трофозоит достиг своего предельного размера, образуется всего 10-12 ядер.
После деления ядра образуется зрелый шизонт, из которого начинают формироваться дочерние клетки (мерозоиты). Пигмент к этому времени собирается в 1-2 кучки. Затем оболочка эритроцита разрывается, мерозоиты выходят в плазму крови (меруляция) и вновь внедряются в эритроциты. Стадия деления продолжается около 6-8 ч. В одном эритроците могут находиться сразу два плазмодия на одной или различных стадиях развития.
После нескольких циклов шизогонии из некоторых мерозоитов развиваются мужские и женские половые клетки - гаметоциты. Вполне сформировавшийся женский гаметоцит (макрогаметоцит) крупнее мужского и, как правило, занимает весь объем увеличенного эритроцита. Он имеет сравнительно небольшое, интенсивно окрашенное в рубиновый цвет, компактное ядро, расположенное на периферии клетки. В темно-голубой протоплазме равномерно рассеяны почти черные палочковидные частицы пигмента. Макрогаметоцит весьма похож на крупный шизонт, от которого его не всегда легко отличить. Иногда в одном эритроците обнаруживаются два макрогаметоцита.
Мужской гаметоцит, или микрогамстоцит, имеет крупное, рыхлое, светло-розовое, центрально расположенное ядро. Бледно-голубая цитоплазма с обильно рассеянным в ней коричневатым пигментом окружает ядро узкой каемкой. Двойные инвазии микрогаметоцитами одного эритроцита встречаются реже, чем макрогаметоцитами. Число гаметоцитов Pl.vivax в крови обычно невелико. Появляются они на второй - третий день заболевания, и затем количество их значительно возрастает.
Эритроциты, пораженные Pl. vivax, увеличиваются в размерах по сравнению с нормальными почти в 1,5 раза. В них появляется красновато-фиолетовая зернистость (зернистость Шюффнера). Она бывает особенно четко выражена в перекрашенных препаратах, что затрудняет выявление паразита. Сам инвазированный эритроцит постепенно обесцвечивается и бледнеет.
Pl.malariae на стадии кольца не отличается от соответствующей формы Pl.vivax. В эритроците встречается не более одного кольца. Трофозоиты имеют правильную, чаще всего округлую форму, нередко встречаются и лентовидные трофозоиты, которые обнаруживаются обычно в тонких участках мазка, где кровь подсыхает быстрее. В протоплазме шизонтов разбросан обильный пигмент в виде грубых округлых темно-бурых глыбок. Зрелый шизонт состоит из 6-12 (чаще из 8) мерозоитов, расположенных вокруг кучки пигмента как лепестки цветка («цветок маргаритки»).
Гаметоциты по форме сходны с гаметоцитами Pl.vivax, но более мелкие. Довольно обильный пигмент представлен грубыми, круглыми зернышками. У микрогаметоцита они коричневые, у макрогаметоцита темно-коричневые, почти черные. Гаметоциты в крови больных обнаруживаются в незначительном количестве не ранее второй - третьей недели от начала заболевания.
Эритроциты, пораженные Pl.malariae, не увеличиваются в размерах, поэтому плазмодии этого вида в них более мелкие, чем Pl.vivax.
Pl.falciparum в периферической крови находится, как правило, на стадии кольца. Диаметр колец в начале их развития не более диаметра эритроцита, что имеет важное диагностическое значение, т. к. кольца остальных видов плазмодиев в этот период значительно крупнее. При дальнейшем развитии размеры колец Pl.falciparum увеличиваются и отличить их от соответствующей стадии других видов плазмодиев становится труднее. Однако следует иметь в виду, что в одном эритроците часто находятся 2-3 кольца Pl. faiciparum, a кольцо Pl.malariae бывает только одно. Эритроциты же с двумя или тремя кольцами Pl.vivax обычно уже увеличены, обесцвечены и содержат зернистость Шюффнера, тогда как величина эритроцитов, инвазированных Pl.falciparum, остается прежней и зернистость в их цитоплазме отсутствует. Иногда встречаются незамкнутые кольца Pl. falciparum.
При обычном течении тропической малярии в мазках обнаруживаются только кольца, т. к. дальнейшее развитие Pl.falciparum проходит в капиллярах внутренних органов. Лишь в очень тяжелых случаях заболевания трофозоиты и шизонты встречаются, хотя и в небольшом количестве, в периферической крови. Трофозоиты мелкие, заполняют не более 2/3 эритроцита, по форме сходны с трофозоитами четырехдневной малярии. Для них характерно быстрое исчезновение вакуолей и раннее скучивание глыбок темного пигмента. Зрелый шизонт состоит из 12-24 мелких мерозоитов, которые располагаются беспорядочно вокруг кучки пигмента.
Сформировавшиеся гаметоциты имеют полулунную форму или напоминают банан. Они обнаруживаются на 12-14 день болезни. Этот признак имеет важное диагностическое значение и свидетельствует о давности заболевания. Макрогаметоциты - более узкие, вытянутые, окрашиваются в голубой, синевато-серый цвет. В центре находится компактное, окрашенное в красный цвет ядро, прикрытое черными, неправильной формы грубыми глыбками пигмента, вследствие чего оно кажется темным. Микрогаметоциты более короткие (особенно молодые). Цитоплазма их розовато-серая или сиреневая; ядро бледно-розовое, крупное, нечетко отграниченное от цитоплазмы. Зерна пигмента немногочисленные, грубые, коричневые, рассеяны по всей клетке паразита, несколько концентрируясь в средней ее части.
Гаметоциты полностью заполняют и растягивают эритроциты (в длину их размер может достигать двух диаметров эритроцитов), поэтому бывает видна только узкая пленка эритроцита на вогнутой стороне полулуния.
В крови больных тропической малярией могут встречаться только одни гаметоциты, что наблюдается после проведенного курса лечения шизонтоцидными препаратами, к которым гаметоциты весьма устойчивы.
Pl.ovale на различных стадиях эритроцитарного цикла развития имеет сходство с соответствующими стадиями Pl.vivax или Pl.malariae. Пораженные плазмодием эритроциты увеличиваются в размерах и принимают угловатую или овальную форму (отсюда название паразита); некоторые из них с фестончатыми краями. Эритроциты обесцвечиваются, и в их цитоплазме появляется обычно хорошо выраженная зернистость Джеймса, похожая на зернистость Шюффнера в эритроцитах, инвазированных Pl.vivax. В мазке встречаются кольца и зрелые трофозоиты Pl.ovale, похожие на такие же стадии Pl.malariae, но с более крупными ядрами. Пигмент в виде темно-бурых глыбок разбросан по всей цитоплазме трофозоита. У зрелого шизонта собранные в кучку глыбки пигмента лежат не в центре эритроцита, как у Pl.malariae, а сбоку, между беспорядочно расположенными мерозоитами. Паразит делится на 6-12 мерозоитов (чаще на 8). Гаметоциты сходны с гаметоцитами P. vivax.