АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

СТАФИЛОКОККИ

Биологические свойства и систематика стафилококков представлены в главе 11.

Коагулазоположительные стафилококки вызывают воспалительные процессы у людей и животных. Однако они настолько широко распространены во внешней среде, что единичное их выявление не вызывает опасений.

Как санитарно-показательные микроорганизмы патогенные стафилококки часто используют при оценке воздуха, гигиенического состояния лечебных и детских учреждений и выявлении опасности развития в них так называемого госпитализма.

Для пищевых продуктов этот показатель имеет другое значение, так как беспокойство вызывает не патогенность стафилококков, а энтеротоксигенность, т.е. способность вырабатывать энтеротоксин, обусловливающий пищевые интоксикации.

С этой целью выявляют наличие Staph. aureus; его количество в молочных продуктах регламентируется Санитарными правилами и нормами. Например, в кисломолочных продуктах присутствие золотистого стафилококка не допускается: в 0,1 г творога и творожных изделий; в 1 см³ сметаны всех видов, ряженки, кефира жирного, кисломолочных напитков. В жидких заквасках Staph. aureus не допускается в 10 см³.

Для выделения культур токсигенных стафилококков и с целью дифференциации их от сапрофитов чаще используют элективно-дифференциальные питательные среды: желточно-солевой агар (ЖСА) и молочно-солевой агар (МСА). Методы обнаружения стафилококков основаны на их способности расти на средах с повышенным содержанием поваренной соли.

Желточно-солевой агар готовят на основе солевого агара. Для его приготовления к мясо-пептонному бульону (рН 7,2-7,4) добавляют 2 % агара и 6,5 % хлористого натрия, расплавляют на водяной бане, фильтруют, разливают по 100 см³ или 250 см³, стерилизуют при 12 ГС в течение 30 мин.

Вместо мясо-пептонного бульона можно использовать сухой питательный агар, добавив к нему только 6,5 % NaCl.

Для приготовления желточно-солевого агара к 100 см³ стерильного расплавленного и охлажденного до 45 °С солевого агара добавляют 20 см³ эмульсии яичного желтка. После полного размешивания ЖСА разливают в стерильные чашки Петри по 20-25 см³ и хранят при температуре 4-6 °С в течение до 7 суток.

Для приготовления эмульсии яичного желтка на дно стерильной чашки Петри помещают куриное яйцо, которое предварительно тщательно протирают ватой, смоченной этиловым спиртом. Стерильным пинцетом пробивают с двух противоположных сторон яйца два отверстия. Через одно из этих отверстий из яйца полностью удаляют белок, а затем, несколько увеличив отверстие, выливают желток в стерильную колбу вместимостью 200 см³. К желтку постепенно добавляют (частями по 20-30 см³) 180-200 см³ стерильного 0,8%-ного раствора хлористого натрия, тщательно встряхивают до получения гомогенной массы.

При росте патогенных стафилококков на этой среде вокруг их колоний образуются зоны помутнения среды, т. е. они дают положительную реакцию на лецитиназу. Если стафилококки, вырастающие на ЖСА, не дают лецитиназной реакции, их отсеивают на скошенный мясо-пептонный агар и в дальнейшем дифференцируют в реакции плазмокоагуляции.

Лецитиназа относится к группе ферментов фосфолипаз. Она способна расщеплять гидролизом лецитин.

Молочно-солевой агар готовят также на основе солевого агара. На 100 см³ стерильного расплавленного и охлажденного до 45 °С солевого агара добавляют 10 см³ стерильного обезжиренного теплого молока. Среду тщательно перемешивают и разливают по чашкам.

На МСА колонии стафилококков имеют форму дисков с диаметром 2-4 мм с ровными краями, могут быть пигментированы в разнообразный цвет - желтый, белый, лимонный. Не менее 5 характерных колоний отсевают на скошенный мясо-пептонный агар и в дальнейшем с этими культурами ставят реакцию плазмокоагуляции (для дифференциации патогенных и сапрофитных стафилококков).

Реакция плазмокоагуляции. В пробирку с 0,5 см³ стерильной плазмы крови вносят одну бактериологическую петлю агаровой или 0,1 см³ бульонной 18-24 часовой культуры испытуемого микроорганизма. Инкубируют при 37 °С и учитывают результат через 30 мин, 2, 4 и 24 ч. Положительный результат - образование плотного или рыхлого сгустка; если использовали разведенную плазму, то сгусток плавает в жидкости.

Приготовление плазмы. Используют плазму кролика, цельную или разведенную физиологическим раствором 1:2—1:4. Взятую у кролика пункцией сердца кровь (около 10 см³) помещают в пробирку с 1 см³ 5%-ного стерильного раствора лимоннокислого натрия, тщательно перемешивают, центрифугируют. Плазму (надосадочную жидкость) переносят в стерильные пробирки и хранят в холодильнике 4-5 сут.

Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 1559 | Нарушение авторских прав