Молекулярно-генетический метод
Вэтом методе различают (по направлению исследований): молекулярно-цитогенетические методы и молекулярно-биологические методы.
Основными методами ДНК-диагностики являются блот-гибридизация, анализ полиморфизма длин рестрикционных фрагментов ДНК (ПДРФ), полимеразная цепная реакция (ПЦР), анализ полиморфизма микросателлитных последовательностей.
Сущность блот-гибридизации заключается в «нарезании» с помощью специальных ферментов (рестриктаз) фрагментов ДНК различной длины, набор которых для каждой рестриктазы постоянен. Смесь фрагментов разделяют с помощью электрофореза, переносят на фильтр, фиксируют и подвергают гибридизации с зондом, имеющим радиоактивную или флюоресцентную метку.
Зонд выявляет один фрагмент из множества и комплементарно с ним спаривается. Изменение фрагмента по сравнению с контролем указывает на наличие мутации в гене или в непосредственной близости от него.
Если ген картирован, то возможно прямое выявление мутации (делеции, инверсии, транслокации). С такими мутациями в одном гене связаны, например, серповидно-клеточная анемия и дефицит гормона роста.
Возможна диагностика вирусных и бактериальных инфекций, онкологических заболеваний, а также оценка риска болезней с наследственной предрасположенностью. Такая диагностика позволяет выявить болезнь в доклинической стадии, когда клинические симптомы практически отсутствуют. Возможна пренатальная диагностика, в том числе преимплантационная, то есть в период, когда дробящаяся зигота еще не внедрилась в стенку матки. Во всех случаях это представляется очень важным для профилактики болезни и связанного с ней аномального развития ребенка. В настоящее время такие методы разработаны для диагностики ФКУ, миодистрофии Дюшенна — Беккера, гемофилии А и Б и некоторых других.
При некоторых болезнях пренатальная диагностика позволяет проводить профилактическое пренатальное лечение, например, такое лечение эффективно при болезни Вильсона-Коновалова, связанной с нарушением обмена меди, и при адреногенитальном синдроме, связанном с эндокринными нарушениями. Раннее лечение приводит к заметному снижению тяжести болезни у ребенка. Большое значение имеет ДНК-диагностика рака.
Метод флюоресцентной in situe гибридизации — более совершенный аналог метода гибридизации с использованием радиоактивной метки. Гибридизация ДНК проводится с различными ДНК-зондами, клонированными нуклеотидными последовательностями конкретного гена. Для изучения результатов гибридизации используют метод флюоресцентной микроскопии. Метод используется для идентификации хромосом, фрагментов онкогенов и других генов. Метод ДНК-зондовой диагностики. Используется для прямой диагностики наследственных болезней.
Еще один подход к ДНК-диагностике наследственных болезней основывается на анализе семейного распределения сайтов с менделевским наследованием (участков молекулы ДНК) узнавания рестриктаз в гене и изучении полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ). С помощью ПДРФ осуществляют пренатальную диагностику ФКУ.
Одним из вариантов в ДНК-диагностике является также подбор ПДРФ-зондов, тесно сцепленных с маркерами болезни. Маркерный участок не обязательно локализован в изучаемом гене, однако он должен быть на достаточно близком расстоянии, чтобы частота рекомбинации между ним и ПДРФ-маркером была пренебрежительно мала. В этом случае могут быть неизвестны как мутантные гены, так и первичные биохимические дефекты.
Для ДНК-диагностики используются такие методы полимеразной реактивности in situe и полимеразная цепная реакция, позволяющие амплификацию (размножение небольших участков ДНК-праймеров, соответствующих фрагментам того или иного гена). Имея базу данных праймеров, можно картировать гены и диагностировать мутации.
ТЕМА № 3 Организация генетического материала
Дата добавления: 2015-01-12 | Просмотры: 909 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 | 61 | 62 | 63 | 64 |
|