АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Методы этиологической диагностики

Методы лабораторной диагностики играют решающую роль в подтверждении диагноза. Среди них выделяют методы идентификации возбудителя (антигена) и методы выявления нарастания титра специфических антител в динамике заболевания.

Бактериологический посев материала на селектив­ные среды используют для идентификации возбудите­ля инфекции в содержимом придаточных пазух носа, экссудате полости среднего уха, мокроте, трахеальном аспирате, плевральном экссудате, пунктате легкого и др. В России наиболее распространен посев на среду АГВ, однако при этом результаты исследования могут значительно отличаться от стандартов NCCLS; учиты­вая это, рекомендуется для проведения бактериологи­ческого исследования применять среду Мюллера-Хинтона.

Для выделения и идентификации вирусных возбудите­лей используют посевы материала от больного в переви­ваемые культуры клеток почек обезьян, клетки HeLa, эм­бриональные клетки человека, а также амниотическую полость куриных эмбрионов или путем заражения лабо­раторных животных (белые мыши, кролики, морские свинки и др.) Однако эти методы весьма трудоемки и длительны, поэтому в повседневной работе врача широ­кого распространения не получили, а используются, в ос­новном, для ретроспективной диагностики и для рас­шифровки эпидемических вспышек гриппа, аденовирусных, энтеровирусных и других заболеваний.

Метод иммунофлюоресценции можно считать уни­версальным, сочетающим точный морфологический анализ с высокой специфичностью и разрешающей способностью. Он прост, высокочувствителен и позволяет получить положительный результат через не­сколько часов от начала исследования в отношении любого антигенного вещества вирусной, бактериаль­ной или другой природы.

Он используется для иденти­фикации возбудителей инфекций в чистых и смешан­ных культурах, препаратах, отпечатках, срезах орга­нов и тканей.

Реакция иммунодиффузии используется для выяв­ления как антигенов, так и антител (IgM, IgG) при ви­русных инфекциях, а также для определения токсигенности бактерий. Разновидностями этого метода явля­ются радиоиммунофорез и иммунрэлектрофорез.

Реакция пассивной (РПГА) или непрямой гемагглютинации (РНГА) основаны на использовании эритроци­тов, на поверхности которых сорбируются антигены (бактериальные или вирусные) или антитела. Эритро­циты, сенсибилизированные антигенами, называют антигенными эритроцитарными диагностикумами и ис­пользуют для выявления и титрования антител. Эрит­роциты, сенсибилизированные антителами, называют иммуноглобулиновыми эритроцитарными диагностику­мами и используют для выявления антигена.

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) осно­вана на способности некоторых вирусов вызывать агг­лютинацию эритроцитов. Сущностью реакции является феномен предотвращения (торможения) иммунной сы­вороткой гемагглютинации эритроцитов вирусами.

Реакция связывания комплемента (РСК) позволяет титровать антигены или антитела по степени фиксации комплемента комплексом антиген-антитело и широко применяется для диагностики вирусных инфекций.

Иммуноферментный анализ (ИФА) основан на ис­пользовании антител, конъюгированных с фермента­ми. В качестве последних чаще всего используется пероксидаза и щелочная фосфатаза.

Особенно широко применяется разновидность ИФА - иммуносорбция на твердом носителе (целлюлоза, различные пластмассы и др.), обладающем способно­стью сорбировать различные антигены и антитела. ИФА наиболее перспективный метод диагностики ви­русных, бактериальных и других инфекций.

Радиоиммунологический метод (РИМ) основан на применении радиоизотопной метки антигенов и анти­тел. Сущность метода состоит в том, что определяется количество известного меченного антигена (антитела) до и после его контакта с искомыми антителами (или антигенами). Если последние соответствуют меченному антигену (антителу) и использованным в опыте антите­лам (антигенам), часть или все активные центры анти­тел (антигенов) будут блокированы этим искомым анти­геном (антителом), и добавленный затем меченный ан­тиген (антитело) остается несвязанным или связанным лишь частично, что и будет зарегистрировано радиоме­трически.

Существенным недостатком серологической диагно­стики является ее ретроспективный характер, т.к. для точного подтверждения диагноза необходимо устано­вить нарастание титра специфических антител в дина­мике заболевания, для чего первую сыворотку берут в начале болезни, а вторую - через 7-14 дней и позже. Избежать этого недостатка удается при раздельном оп­ределении антител методом ИФА, при котором обнару­жение антител класса IgM всегда указывает на активно текущий инфекционный процесс, тогда как выявление антител класса IgG свидетельствует о перенесенном за­болевании.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) позволяет опре­делить специфические участки генетической информа­ции (ДНК и РНК) в образце биологического материала. Метод обладает высочайшей чувствительностью и отно­сительной быстротой (реакция длится около 3 часов), по­зволяющей с первых часов заболевания получить исчер­пывающую информацию о возбудителе, уровне его репликативной активности и прогнозировать характер тече­ния и исход заболевания.

Литература

1. Учайкин В.Ф. Руководство по инфекционным болезням у де­тей. М.: Гэотар Медицина, 1998, 809 с.

2. Классификация клинических форм бронхолегочных заболе­ваний у детей. Росс. вестник перинатол. и педиатрии, 1996, т. 41, №6, с. 52-55.

3. Таточенко В.К. (ред.) Острые пневмонии у детей. Чебоксары:

Изд. Чувашского университета, 1994.

4. Страчунский Л.С., Белоусов Ю.Б., Козлов С.Н. (ред). Антибак­териальная терапия. Практическое руководство. М., 2000.

5. Шройт И.Г., Козлюк А.С., Цинзерлинг А.В. Сравнительная па­тология микоплазмоза органов дыхания. Кишинев, 1977.

6. Таточенко В.К. (ред.) Практическая пульмонология детского возраста. М., 2001.

7. Страчунский Л.С., Кречикова О.И., Решедько Г.К. и др. Чувст­вительность к антибиотикам пневмококков, выделенных от здоровых детей из организованных коллективов. Клин. мик­робиология и антимикробная терапия 1999; т. 1, №1, с. 31-39.

Материалы для данной главы предоставили:

С.Г.Горбунов, А.В.Горелов, В.К.Таточенко, Ф.С.Харламова

Дата добавления: 2015-09-18 | Просмотры: 620 | Нарушение авторских прав