Контроль за течением ВИЧ-инфекции
Правильно оценить состояние больного можно только на основе совокупности клинических и лабораторных данных.
Благодаря выявлению четкой зависимости между клиническими проявлениями ВИЧ-инфекции и числом лимфоцитов CD4 определение этого показателя стало неотъемлемой частью обследования ВИЧ-инфицированных. Если число лимфоцитов CD4 отражает текущее состояние иммунной системы ВИЧ-инфицированных, то по концентрации вирусной РНК в сыворотке или плазме судят о скорости про-грессирования ВИЧ-инфекции. Одновременная оценка числа лимфоцитов CD4 и концентрации вирусной РНК позволяет с высокой точностью предсказать характер дальнейшего течения ВИЧ-инфекции и оценить эффективность анти-ретровирусного лечения. Ценную информацию несут и другие лабораторные показатели, например концентрации в сыворотке антигена р24 (см. выше), неоптерина и Р2-микро-глобулина (см. ниже).
Выделение вируса в культуре клеток. Этот метод применяют во многих исследовательских лабораториях для анализа генетических изменений ВИЧ и выявления штаммов, устойчивых к антиретровирусным средствам. Для выделения вируса исследуемый биологический материал инкубируют (до 28 сут) с культурой клеток, способных поддерживать репродукцию ВИЧ, чаще всего — с культурой нормальных лимфоцитов и моноцитов крови, активированных фитогемагглю-тинином. Во время инкубации периодически проверяют культуру на наличие синцития или гигантских клеток и отбирают пробы культуральной среды для выявления антигена р24 или обратной транскриптазы ВИЧ. Для диагностики ВИЧ-инфекции и наблюдения за ВИЧ-инфицированными выделение ВИЧ в культуре клеток не применяют. Обычно этот метод используют для оценки эффективности лечения ВИЧ-инфекции и для индивидуального подбора антиретро-вирусных средств.
Определение числа лимфоцитов CD4. В большинстве лабораторий абсолютное число лимфоцитов CD4 рассчитывают, исходя из их процентного содержания (по данным проточной цитофлюориметрии) и общего числа лимфоцитов (определяют на основании общего числа лейкоцитов и лейкоцитарной формулы). При падении числа лимфоцитов CD4 ниже 200 мкл"1 резко возрастает риск пневмоцистной пневмонии, а когда это число становится ниже 100 мкл"1, повышается также риск цитомегаловирусной инфекции и инфекции, вызванной Mycobacterium avium-intracellulare (рис. 308.21). После постановки диагноза ВИЧ-инфекции число лимфоцитов CD4 определяют каждые 6 мес, а если отмечается тенденция к снижению этого показателя, то чаще. Антиретро-вирусное лечение обычно назначают, когда число лимфоцитов CD4 опускается ниже 500 мкл"1. Снижение этого показателя после начала лечения говорит о необходимости пересмотра схемы лечения (см. ниже). При числе лимфоцитов
Таблица 308.10. Методы прямого выявления ВИЧ
Метод
Принцип метода
Чувствительность
Стоимость анализа (в долларах США)
Ловушечный ИФА на антиген р24
Определение вирусной РНК методом ПЦР с обратной транскрипцией Определение вирусной РНК методом разветвленной ДНК
Модификация ИФА, позволяющая оценить концентрацию свободного и входящего в состав иммунных комплексов антигена р24 (для диссоциации комплексов используют слабую кислоту)
Основан на амплификации кДНК, синтезированной на матрице вирусной РНК
Основан на гибридизации РНК вируса с ДНК-зондом, фиксированным на твердой подложке, и последующей амплификации сигнала
Результаты положительны у 50% ВИЧ-ин- 1—2 фицированных, порог чувствительности метода — 15 пг/мл
Результаты положительны более чем у 98% 150 ВИЧ-инфицированных, позволяет обнаружить 40 копий вирусной РНК в 1 мл
Результаты положительны у 90% ВИЧ-ин- 150 фицированных, позволяет обнаружить 500 копий вирусной РНК в 1 мл
CD4 ниже 200 мкл ' начинают профилактику пневмоцист- ВИЧ-инфекция и СПИД
| ной пневмонии. В результате эффективного антиретрови-русного лечения повышаются (по крайней мере временно) как абсолютное число лимфоцитов CD4, так и их процентное содержание.
Измерение концентрации вирусной РНК. Для прямого определения ВИЧ в сыворотке чаще всего используют методы, позволяющие с высокой точностью и чувствительностью измерить концентрацию вирусной РНК. Существует два основных метода: метод ПЦР с обратной транскрипцией и метод разветвленной ДНК (табл. 308.10). Первый из них заключается в синтезе кДНК на матрице вирусной РНК и последующей амплификации кДНК (см. выше), второй — в гибридизации исходной РНК вируса с ДНК-зондом, фиксированным на твердой подложке, и последующей амплификации сигнала (гл. 121). Результаты измерения выражают в количестве копий РНК в 1 мл сыворотки. Метод ПЦР с обратной транскрипцией позволяет определить 40 копий вирусной РНК в 1 мл сыворотки, результаты этого исследования положительны более чем у 98% ВИЧ-инфицированных. Метод разветвленной ДНК менее чувствителен — с его помощью можно определить 500 копий вирусной РНК в 1 мл сыворотки, результаты исследования положительны более чем у 90% ВИЧ-инфицированных. Многократное измерение концентрации вирусной РНК позволило установить зависимость между выраженностью виремии и прогрессиро-ванием ВИЧ-инфекции (рис. 308.22), между репродукцией ВИЧ и активацией клеток иммунной системы, а также установить появление штаммов ВИЧ, устойчивых к антиретро-вирусным средствам. Изменение числа вирусов в крови мгновенно отражается на концентрации вирусной РНК, тогда как изменения концентрации антигена р24 существенно запаздывают. Измерение концентрации вирусной РНК в сы-
воротке ВИЧ-инфицированных проводят каждые 6 мес, а при изменении схемы антиретровирусного лечения — еще чаще. Многие рекомендуют начинать антиретровирусное лечение при повышении концентрации вирусной РНК в сыворотке более чем до 20 000 мл"1 независимо от уровня лимфоцитов CD4. Однако единого мнения о показаниях к началу антиретровирусного лечения пока нет. Эффективное лечение приводит к быстрому снижению концентрации вирусной РНК в сыворотке.
Концентрация р2-микроглобулина. Белок Р2-микроглобулин (молекулярная масса 11000) находится на поверхности большинства ядросодержащих клеток, где он образует гетероди-мер с тяжелой цепью HLA класса I. Этот белок имеет высокую степень гомологии с константными участками иммуноглобулинов. Свободный Р2-микроглобулин присутствует в сыворотке и моче. При заболеваниях, сопровождающихся активацией или гибелью лимфоцитов (лимфопролифе-ративных, аутоиммунных и вирусных заболеваниях, включая ВИЧ-инфекцию), а также при поражении почечных канальцев концентрация этого белка в сыворотке повышается. При ВИЧ-инфекции концентрация Р2-микроглобулина в сыворотке минимальна во время бессимптомной фазы и значительно увеличивается на стадии СПИДа. Концентрация Р2-микроглобулина, вместе с числом лимфоцитов CD4, имеет прогностическое значение и позволяет предсказать сроки развития СПИДа. Поданным одного крупного исследования, концентрация этого белка является основным показателем скорости прогрессирования ВИЧ-инфекции. Показано также, что при концентрации Р2-микроглобулина более 3,8 мкг/мл СПИД в течение 3 лет развивается у 34% больных, тогда как при концентрации Р2-микроглобулина
Г
а
О
I
s ^ о
1 2 34 5 6 78 9 10 11 12 13 14 15
Дата добавления: 2015-05-19 | Просмотры: 798 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 | 61 | 62 | 63 | 64 | 65 |
|