 |
|
АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология |
ГЛИБИННЕ СУСПЕНЗІЙНЕ КУЛЬТИВУВАННЯДля глибинного культивування необхідно одержати лінії клітин, які утворюють невеликі агрегати (по 5—10 клітин). Більш придатні пухкі калусні тканини. Трансплантат бажано обробляти пектиназою. Рекомендується використовувати середовище, яке містить 2,4-дихлорофеноксіоцтову кислоту та іони кальцію. У таких середовищах агрегати клітин не утворюються. Перед пересіванням первинну культуру фільтрують через два шари марлі або через-сита (нейлонові, металеві), щоб відокремити великі агрегати калусної тканини і залишки трансплантата. На утворення клітинних агрегатів також впливає інтенсивність перемішу-
вання середовища, оскільки клітини надзвичайно чутливі і швидко лізуються. Більшість клітин гине. Глибинне культивування можна здійснювати в колбах на качалках при частоті обертання 100—120 об/хв. На 60—100 мл середовища використовують 2—3 г свіжої ка-лусної тканини. Для культивування рослинних клітин використовують також спеціальні металеві або скляні ферментатори різної конструкції (з мішалками або барботажного типу). Режим ферментації періодичний або безперервний, головним чином xe-мостатний. Біосинтез проводять в апараті об'ємом від 0,1 до 63 м3 і більше (рис. 9.2). При управлінні процесом вирощування клітин важливо мати гомогенну систему. Аерацію культуральної біомаси здійснюють стерильним повітрям через барботер. Повітря стерилізують, як правило, фільтрацією на двох-трьох послідовно встановлених фільтрах. При культивуванні клітин рослини регулюють температуру (25—37 °С), pH і окисно-відновний потенціал. Процес культивування ведуть доти, поки йде інтенсивний синтез цільового продукту та у середовищі не будуть вичерпані поживні речовини. При визначенні кінця культивування необхідно враховувати дані мікроскопічного контролю стану культури, відсутність сторонньої мікрофлори, концентрацію основних поживних речовин, біомаси, цільового продукту, pH. Необхідно відмітити, що рослинні клітини ростуть і розмножуються значно повільніше, ніж клітина мікроорганізмів. Час їх подвоєння 1—3 доби. Процес культивування рослинних клітин триває 2—3 тижні, це посилює вимоги до забезпечення асептичних умов. Нині при культивуванні клітин у промислових умовах отримують речовини вторинного метаболізму. Цінними є алкалоїди, глікозиди, полісахариди, терпеноїди, поліфеноли, ефірні масла, пігменти та ін. Деякі вторинні метаболіти, одержувані при культивуванні рослинних клітин, наведені в табл. 9.3. Як у будь-якому біотехнологіч-ному процесі, при одержанні мета- Таблиця 9.3 Продукти вторинного метаболізму, одержувані при культивуванні рослинних клітин
HgCO^^^^v^^s^ болітів за допомогою клітин рослинного походження важливого значення набуває активність продуцента. Останні досягнення клітинної інженерії показали, що в деяких випадках метаболіти, які активно продукують рослинні клітини, можна одержати методом злиття протопластів двох вихідних рослинних клітин. При цьому гібридні клітини продукують не тільки метаболіти вихідних рослин, але й зовсім інші. Гібридизацію рослинних протопластів успішно здійснюють методом електростимуляції злиття клітин або прямим мікроін'єкціюванням ДНК однієї клітини в іншу. Ямомо-то одержав таким способом гібридні клітини з Coptus japonica і Euphorbia millii, які активно продукували алкалоїд берберин — антибактеріальну і протитифозну речовину. Концентрація берберину в культуральній рідині досягає 1,39 г/л. Дата добавления: 2016-03-26 | Просмотры: 489 | Нарушение авторских прав |
