АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Сечостатевий хламідіоз

Патогенні хламідії, особливо C. trachomatis, досить часто викликають гострі або хронічні запалення уретри, вагіни, шийки матки. Урогенітальний хламідіоз впродовж останнього десятиріччя зустрічається частіше, ніж сифіліс і гонорея. Основний шлях передачі захворювань – статевий, значно рідше – побутовий.

Матеріалом для лабораторного дослідження служать зскрібки зі слизової уретри у чоловіків і жінок та зскрібки із шийки матки у жінок. Український НДІ дерматології та венерології розробив уніфіковані методи діагностики сечостате-вих хламідіозів. Серед них важливе значення мають експрес-методи, виявлення морфологічних структур та антигенів хламідій у досліджуваному матеріалі, виді-лення хламідій в культурах клітин, виявлення хламідійних антитіл за допомогою серологічних реакцій та полімеразна ланцюгова реакція.

Експрес-методи. Ряд фірм США та Франції розробили спеціальні діагнос-тичні тести для проведення імунохроматографічних експрес-методів, які можуть видати результат через 10-30 хв. Однак їх чутливість і специфічність значно мен-ша, ніж при проведенні повномасштабних досліджень.

Мікроскопічні методи. Досліджуваний матеріал беруть у хворих, які протягом місяця не повинні приймати антибіотики. Зскрібки роблять одноразо-вим зондом (щіточкою, ложечкою Фолькмана, жолобкуватим зондом). Інфекцій-ний матеріал наносять на поверхню 8 мм ямки спеціального предметного скла. Мазок висушують 20-30 хв і фіксують у холодному ацетоні протягом 5-10 хв, за-барвлюють за методом Романовського-Гімзи 35-40 хв, обробляють підкисленим етанолом (3-5 крапель льодяної оцтової кислоти на 15-20 мл спирту) протягом 5-10 с, промивають водою, висушують і мікроскопують. Ретикулярні тільця забарв-люються в синьо-фіолетовий колір, а елементарні тільця – в рожево-червоний. Зернисті структури хламідій розміщуються поблизу ядра. Виявлення 5-10 типо-вих включень має діагностичне значення.

Антигени хламідій в інфекційному матеріалі виявляють за допомогою пря-мої і непрямої реакції імунофлуоресценції. Суть прямого методу полягає у з’єднанні мічених флуорохромом антитіл із хламідійним антигеном і виявленні специфіч-ного світіння при люмінесцентній мікроскопії. Люмінесцентна антихламідійна сироватка виготовляється в Харкові. Є багато закордонних діагностичних систем для проведення цього методу.

Суть непрямого методу полягає у з’єднанні комплексу антиген + немічені хламідійні антитіла з видовою (антиглобуліновою) міченою флуоресцеїном сиро-ваткою.

Окрім мікроскопічних методів, антигени хламідій в інфекційному матеріалі можна виявити за допомогою імуноферментного аналізу. Принцип методу поля-гає у взаємодії моноклональних хламідійних антитіл, адсорбованих на твердій фазі, з антигеном хламідій, що знаходиться у досліджуваному матеріалі, й утво-ренні імунних комплексів. Матеріалом для аналізу можуть бути зскрібки зі слизо-вих оболонок, центрифугати сечі, секрети, біоптати тощо.

Розділ 11. Мікробіологічна діагностика окремих інфекційних захворювань 311

Вже розроблено й впроваджено в практику багато діагностичних тест-сис-тем для ІФА. Досліджуваний матеріал вносять на адсорбовані в лунках планшети антитіла. Оцінка результатів проводиться за допомогою імуноферментного аналі-затора згідно з інструкцією до кожної тест-системи. Чутливість ІФА для виявлен-ня хламідій коливається в межах 50-70 % у чоловіків і 88-100 % у жінок.

Виділення хламідій в культурах клітин. Найбільш точним і доказовим ме-тодом діагностики хламідіозу є виділення збудника на культурі клітин (золотий стандарт). Найчастіше використовують культури клітин L-929, McСoy, Hela, BHK-21. У стерильні плоскодонні пробірки діаметром 14 мм вносять на дно покрівні скельця, додають по 1 мл клітинної суспензії в живильному середовищі (1·10⁵ клітин/мл) і ставлять на 24-48 год у термостат при 37 °С для утворення моношару клітин на покрівних скельцях. Потім середовище виливають, вносять інфекційний матеріал, оброблений антибіотиками, центрифугований протягом години при 3000 об/хв, інкубують у термостаті 2 год при 37 °С. Досліджуваний матеріал виливають, замінюють його свіжим живильним середовищем, інкубу-ють у термостаті 48-72 год. Покрівні скельця з моношаром клітин виймають, фіксу-ють 10 хв метанолом, промивають фосфатним буфером і забарвлюють за методом Романовського-Гімзи. Покрівні скельця монтують на предметному склі моноша-ром клітин донизу в канадському бальзамі.

Під імерсійним об’єктивом виявляють наявність цитоплазматичних включень. Елементарні тільця хламідій забарвлюються у червоний, а ретикулярні тільця – у синій колір.

При обробці препаратів флуоресцентними антитілами моношар клітин також монтують на предметному склі в гліцерині й досліджують за допомогою люмінес-центного мікроскопа. Метод високоспецифічний (100 %) і чутливий (75 %), але досить складний, дорогий, результат отримують через 72-96 го д. Окрім то го, є вели-кий ризик зараження персоналу. Для практичних лабораторій він ще малодоступний.

Імунологічна діагностика. У сучасній практиці серологічних досліджень сечостатевих хламідіозів використовують 4 імунологічні реакції: непрямої іму-нофлуоресценції, непрямої гемаглютинації, зв’язування комплементу та метод імуноферментного аналізу. Матеріалом для дослідження в усіх 4-ох реакціях є сироватка крові хворих, секрети статевих залоз.

З метою виявлення хламідійних антитіл у реакції непрямої імунофлуорес-ценції застосовують специфічний хламідійний антиген, який забезпечує реакції з антитілами до всіх варіантів C. trachomatis.

При постановці цієї реакції на предметному склі готують слайд-антигени. Скло вміщують на трафарет із зазначенням зон нанесення антигенів (контрольно-го і специфічного). Слайди висушують 15-20 хв і фіксують в охолодженому аце-тоні. Потім на слайд-антигени наносять відповідні розведення сироватки, інку-бують 40 хв при 37 °С у вологій камері. Після цього препарат тричі промивають фосфатним буферним розчином, додають антивидову люмінуючу сироватку, ще раз витримують 40 хв у вологій камері й знову тричі промивають. Висушені слайди досліджують під люмінесцентним мікроскопом. Техніку постановки ре-

Частина ІІІ. Спеціальна мікробіологія

акції виконують згідно з інструкцією, що додається до кожної діагностичної тест-системи.

Оцінку результатів проводять за ступенем специфічної флуоресценції ко м п -лексів елементарних і ретикулярних тілець з антитілами, використовуючи кла-сичну чотириплюсову систему. Титром хламідійних антитіл сироватки хворого вважають те найбільше її розведення, при якому спостерігається чітке яскраво-зелене світіння не менше, ніж на 2+. При хламідійному ураженні сечостатевої системи він дорівнює 1:64 і вище. Постановка РІФ методом парних сироваток повинна виявити наростання титру антитіл у 4 рази від початкового рівня.

Рекцію непрямої гемаглютинації використовують, в основному, для діагности-ки зоонозних хламідіозів і первинного серологічного скринінгу захворювань у людей.

Реакція зв’язування комплементу дає змогу виявити антитіла до родоспеци-фічного антигену хламідій. Ставлять її за звичайною схемою. Діагноз вважають позитивним при титрі комплементзв’язуючих антитіл 1:64 і вище. РЗК мало підхо-дить для діагностики хламідійних інфекцій генітальної системи.

Виявлення хламідійних антитіл імуноферментним методом базується на взає-модії антигену з хламідій на поверхні лунок полістирилових планшет з IgM і IgG у сироватках хворих людей. Уж е виготовлена велика кількість діагностичних наборів.

Спочатку сироватку хворого розводять у допоміжному ряді пробірок, потім проводять сорбцію антитіл у лунках мікротитрувального планшета. Детальна ме-тодика постановки ІФА викладена в інструкції, що додається до діагностичної тест-системи. ІФА рекомендують ставити за допомогою парних сироваток. Оцін-ку результатів здійснюють за допомогою імуноферментного аналізатора за вели-чиною оптичної щільності розчинів у лунках полістирилового планшета.

Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 597 | Нарушение авторских прав