АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Схема кількісного методу реакції Вассермана

Таблиця 62

лікування сифілісу. Швидке зниження титру реагінів вказує на успішну терапію. Якщо ж титр сироватки довго не знижується, це свідчить про відсутність ефек-тивності застосованих препаратів і необхідність змінити тактику лікування.

При підозрі на серонегативний первинний сифіліс або прихований, третин-ний чи вроджений, рекомендують ставити реакцію Вассермана на холоді за тією ж схемою. В разі підозріння на нейросифіліс РВ проводять із спинномозковою рідиною, яку не інактивують, оскільки вона не містить власного комплементу. В реакцію вводять нерозведений ліквор і в розведеннях 1:2 і 1:5.

Реакція Вассермана стає позитивною через 2-3 тижні після появи твердого шанкру. При вторинному сифілісі вона випадає позитивною в 100 % випадків, у третинному – в 75 %.

Окрім того, в комплексі серологічних реакцій (КСР) як скринінг-тест викорис-товують мікрореакцію преципітації з плазмою крові або інактивованою сироваткою.

Частина ІІІ. Спеціальна мікробіологія

Мікрореакцію преципітації ставлять із кардіоліпіновим антигеном. Прин-цип реакції полягає в тому, що при додаванні до плазми або сироватки крові хво-рого на сифіліс емульсії кардіоліпінового антигену утворюється преципітат (ко м -плекс антиген-антитіло), який осідає у вигляді пластівців білого кольору. Корис-туються такою методикою: у лунку пластини вносять піпеткою три краплі плазми (або інактивованої сироватки), потім додають одну краплю емульсії стандартного кардіоліпінового антигену. Компоненти реакції змішують струшуванням пласти-ни протягом 5 хв, після чого додають три краплі 0,9 % розчину хлориду натрію і залишають при кімнатній температурі ще на 5 хв. Обов’язково ставлять контроль із слабопозитивною сироваткою крові. Результати оцінюють неозброєним оком над штучним джерелом освітлення. При появі в лунці великих пластівців реакцію вважають позитивною (4+, 3+), середніх і дрібних – як слабопозитивну (2+, 1+). При негативному результаті преципітат не утворюється.

Мікрореакцію преципітації можна проводити і кількісним методом для вста-новлення титру преципітуючих антитіл і оцінки на цій основі ефективності ліку-вання. Більш високі титри МРП отримують з плазмою, ніж із сироваткою. За кор-доном аналогом МРП із сироваткою хворого є VDRL (Veneral disease research laboratory), а з плазмою – RPR (Rapid plasma reagin).

Реакція імунофлуоресценції (РІФ). До групи специфічних реакцій, які ши-роко вживаються для серологічної діагностики сифілісу, відноситься непряма ре-акція імунофлуоресценції. Як антиген, в ній використовують завись патогенних блідих трепонем штаму Нікольса із паренхіми яєчок кролика на 7-ий день після зараження. Реакцію ставлять у двох модифікаціях: РІФ-АБС і РІФ-200. У першо-му варіанті використовують сорбент антитіл (сонікат) – ультраозвучений трепо-немний антиген для РЗК. Його випускає Каунаське підприємство з виробництва бактерійних препаратів (Литва). При варіанті РІФ-200 сироватку хворого розво-дять у 200 разів з метою зняти вплив групових протитрепонемних антитіл.

Постановку РІФ-АБС проводять на тонких, добре знежирених предметних скельцях. На зворотному боці скелець склорізом позначено 10 кружечків, діамет-ром 0,7 см. У межах кружка на скло наносять антиген – завись блідих трепонем – у такій кількості, щоб у полі зору їх було 50-60. Мазки висушують на повітрі, фіксують над полум’ям і 10 хв в ацетоні. В окрему пробірку вносять 0,2 мл сор-бенту (сонікату) і 0,5 мл сироватки крові хворого, добре перемішують. Суміш на-носять на мазок (антиген) так, щоб рівномірно його покрити, витримують 30 хв у вологій камері при 37 °С (І фаза реакції). Після цього мазок промивають фосфат-ним буфером, висушують і наносять на нього антиглобулінову флуоресцуючу си-роватку на 30 хв, ставлять у вологу камеру при 37 °С (ІІ фаза). Препарат знову промивають фосфатним буфером, висушують і досліджують під люмінесцентним мікроскопом.

При позитивній реакції бліді трепонеми випромінюють золотаво-зелене сяй-во, при негативній – не світяться.

Техніка постановки РІФ-200 така сама, як і РІФ-АБС, тільки сироватку крові хворого попередньо розводять у 200 разів фосфатним буфером. При проведенні

Розділ 11. Мікробіологічна діагностика окремих інфекційних захворювань 289

реакції імунофлуоресценції з спинномозковою рідиною хворого на сифіліс нерво-вої системи використовують РІФ-ц і РІФ-10, тобто ліквор вводять у реакцію не-інактивованим і нерозведеним, або розведеним 1:10.

Реакція іммобілізації блідих трепонем (РІТ) грунтується на феномені втра-ти їх рухливості у присутності іммобілізуючих протитрепонемних антитіл сиро-ватки хворого і комплементу в умовах анаеробіозу. Як антиген в реакції викорис-товують завись блідих трепонем із тестикулярної тканини кролика, зараженого лабораторним штамом Нікольса. Завись розводять стерильним 0,85 % розчином хлориду натрію так, щоб у полі зору було 10-15 спірохет.

Для проведення реакції в стерильній пробірці змішують 0,05 мл сироватки крові хворого, 0,35 мл антигену і 0,15 мл комплементу. Дослід супроводжують контролями сироватки, антигену і комплементу (табл. 63). Пробірки вміщують в анаеростат, створюють анаробні умови і витримують у термостаті 18-20 год при температурі 35 °С. Потім із кожної пробірки готують препарат надавленої краплі, підраховують не менше 25 трепонем і відмічають, скільки з них рухливих і скільки нерухливих. Відсоток специфічної іммобілізації блідих трепонем підраховують за такою формулою:

де Х – відсоток іммобілізації, А – число рухливих трепонем в контрольній пробірці, В – число рухливих трепонем у дослідній пробірці. Реакція вважається позитивною, ко л и відсоток іммобілізації становить 50 і більше, слабопозитивною – від 30 до 50, сумнівною – від 20 до 30 і негативною – від 0 до 20.

Приклад позитивної РІТ:

Таблиця 63

Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 740 | Нарушение авторских прав