Гепатит А
Збудник епідемічного гепатиту А належать до родини Picornaviridae, роду Hepatovirus, типу 72. Він має сферичну форму, кубічний тип симетрії, діаметр зрілого віріона – 27-32 нм. У центрі віріона міститься однониткова лінійна плюс-нитка РНК. Поверхня капсиду створюється 32 окремими капсомерами, поверх-невих виступів немає (рис. 94). Віруси мають чотири структурних білки – VР1, VР2, VР3, VP4.
Від інших ентеровірусів вірус гепатиту А відрізняється більш високою рези-стентністю до дії факторів зовнішнього середовища. Зокрема, він частково збері-гає свою інфекційність у культурі клітин при 60 °С протягом 4-12 год, тижнями при кімнатній температурі, протягом кількох місяців при 4 °С. Ультрафіолетове випромінювання знищує його за 1 хв, при автоклавуванні (121 °С) – за 20 хв, дія сухого жару (180 °С) – за одну годину. Вірус чутливий до формаліну, хлораміну, хлорного вапна.
З метою лабораторної діагностики використовують вірусологічні, серологічні та експрес-методи.
Вірусологічна діагностика грунтується на виявленні самого збудника, або його антигенів після нагромадження його в спеціальних тест-системах. Матеріа-лом для такого дослідження є фекалії хворого, які можна використати, починаючи з другого тижня інкубаційного періоду, і протягом 14-21 дня жовтяничного періо-д у. Їх піддають попередній підготовці, яка полягає в одержанні гомогенізованого у фосфатному буфері 10-40 % фекального екстракту. Під час цього процесу віруси концентрують, використовуючи фільтрування матеріалу через сефарозу, а також центрифугування за градієнтом щільності хлориду цезію.
Одержаним матеріалом заражують культури клітин нирок ембріону макак-резус (FrhK-4, FrhK-6), первинної гепатоцелюлярної карциноми, лімфобластів людини та інші. Слід відзначити, що вірусам гепатиту А притаманний довгий цикл
репродукції, який триває 4-10 тижнів без по-мітної цитопатичної дії.
У заражених клітинах віруси або їх анти-
гени можна виявити за допомогою імунної
електронної мікроскопії (ІЕМ), РІФ, РІА, ІФА.
Імунна електронна мікроскопія передба-
чає змішування суспензії вірусів з відповідною
антисироваткою, відділення імунних комп-
лексів з наступним дослідженням останніх під
електронним мікроскопом. В умовах негатив-
Рис. 94. Вірус гепатиту А ного контрастування можна виявити агрегати
(за Хіллеманом). вірусів при концентрації менше 106 у 1 г
Розділ 13. Лабораторна діагностика вірусних інфекцій
матеріалу. Однак у зв’язку з великою трудоємністю, цей метод у практичних лабо-раторіях не використовується.
Реакцію імунофлуоресценції можна використати і при дослідженні біоптатів печінки. При прямій імунофлуоресценції користуються міченим флуоресцеїнізо-тіоцианатом IgG, виділеним із сироваток реконвалесцентів. Цінність методу по-лягає в тому, що він дозволяє знайти окремі клітини, які містять антиген.
Радіоімунний та імуноферментний аналізи в твердій фазі. Ці методи найрозповсюдженіші в діагностиці, мають однакову високу чутливість і спе-цифічність. Вони мають один і той же принцип постановки з тією різницею, що в РІА використовують специфічні імуноглобуліни (IgG), мічені 125І, а в ІФА – ферментом пероксидазою.
Наявність вірусів у фекаліях є 100 % підтвердженням діагнозу, однак від-сутність їх за даними серологічних реакцій не виключає гепатит А.
У окремих випадках матеріалом від хворого можна заражати лабораторних тварин. Найчастіше у високоспеціалізованих лабораторіях використовують мавп шимпанзе, мармозет, павіанів та інших.
Пізніше в матеріалі від тварин виявляють віруси гепатиту А або його антиге-ни вищеописаними способами.
Експрес-діагностика гепатиту А спрямована на безпосереднє визначення вірусів у випорожненнях хворого. З цією метою використовують сучасні методи імунної електронної мікроскопії, радіоімунний аналіз, реакцію ензиммічених ан-титіл. Останній є достатньо чутливим і ефективним. Генетичний аналіз базується на ПЛР.
Серологічне дослідження. Одним із способів доказу етіологічної належності виділеного від хворих вірусу є виявлення в парних сироватках крові зростання титру специфічних антитіл. При захворюванні антитіла з’являються рано, їх син-тез починається ще в інкубаційному періоді, а титр різко зростає. У зв’язку з пізнім поступленням хворих у стаціонар чотирикратне діагностичне збільшення титру антитіл виявити практично неможливо. То м у цей метод діагностики не знайшов широкого застосування.
Антитіла проти вірусу гепатиту А в інкубаційному періоді й на початку гос-трої фази захворювання представлені класом IgM. Поступово знижуючись у титрі, вони циркулюють протягом 6-8, а деколи й 12-18 місяців. Анти-ВГА IgM синтезу-ються у всіх хворих, незалежно від форми інфекції. Знаходження їх – ранній тест діагностики, який дозволяє не тільки підтвердити або заперечити клінічний діаг-ноз, але й виявити стерті, безсимптомні форми хвороби, що має вирішальне зна-чення в епідеміологічих дослідженнях. У подальшому їх заміщує IgG. Імуногло-буліни класу М можна знаходити в крові протягом 3-6 місяців після перенесеного захворювання, в той час як IgG – протягом усього життя. Антитіла виявляють за допомогою РІА або ІФА.
Крім визначення анти-ВГА IgM, для діагностики в гострому періоді захво-рювання в сироватці виявляють анти-ВГА IgA, які також є ранніми антитілами і
Частина ІV. Вірусологія
зростають паралельно з IgM, проте зниження їх титру відбувається значно швид-ше. Секреторні анти-ВГА IgA знайдено також у фекаліях.
Найчастіше для визначення титру антитіл використовують ІФА, РІА, деко-ли – РЗК.
Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 672 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 | 61 | 62 | 63 | 64 | 65 | 66 | 67 | 68 | 69 | 70 | 71 | 72 | 73 | 74 | 75 | 76 | 77 | 78 | 79 | 80 | 81 | 82 | 83 | 84 | 85 | 86 | 87 | 88 | 89 | 90 | 91 | 92 | 93 | 94 | 95 | 96 | 97 | 98 | 99 | 100 | 101 | 102 | 103 | 104 | 105 | 106 | 107 | 108 | 109 | 110 | 111 | 112 | 113 | 114 | 115 | 116 | 117 | 118 | 119 | 120 | 121 | 122 | 123 | 124 | 125 | 126 | 127 | 128 | 129 | 130 | 131 | 132 | 133 | 134 | 135 | 136 | 137 | 138 | 139 | 140 | 141 | 142 | 143 | 144 | 145 | 146 | 147 | 148 | 149 | 150 | 151 | 152 | 153 | 154 | 155 | 156 | 157 | 158 | 159 | 160 | 161 | 162 | 163 | 164 | 165 | 166 | 167 | 168 | 169 | 170 | 171 | 172 | 173 | 174 | 175 | 176 | 177 | 178 | 179 | 180 | 181 | 182 | 183 | 184 | 185 | 186 | 187 | 188 | 189 | 190 | 191 |
|