АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология
|
Класифікація діареєгенних ешерихій
Ураження
| С
| ерогрупи
Н-антинген
|
|
О-антиген
|
К-антинген
| Кишечника Ентеротоксигенні (ЕТКП)
| 06, 08, 011, 015, 020, 025, 027, 063, 078, 080, 085, 0114, 0115, 0126, 0128, 0139, 0148, 0153, 0159, 0166, 0167
| Н4, Н7, Н9, Н11, Н12, Н19, Н20, Н21, Н28, Н40
|
| Ентеропатогенні (ЕПКП)
| 018, 026, 044, 055, 086, 011, Н2, Н6, Н7, Н11, 0112, 0114, 0119, 0125, 0127, Н12, Н14, Н18 0128, 0142, 0158
|
| Ентероінвазивні (ЕІКП)
| 028, 029, 0112, 0115, 0124, 0135, 0136, 0143, 0144, 0152, 0164, 0167
|
|
| Ентерогеморагічні (ЕГКП)
| 026, 0111, 0157
| Н6, Н7, Н8, Н11
|
| Сечовивідні шляхи
| 01, 02, 04, 06, 07, 08, 09, 011, 018, 022, 025, 062, 075
|
| К1, К2, К5, К12, К13
| Бактеріємія
| 01, 02, 04, 06, 07, 08, 09, 011, 018, 022, 025, 075
|
| К1, К2, К5, К12, К15, К23
| Менінгіти
| 01, 06, 07, 016, 018, 083
|
| К1
| ураження, ентерогеморагічні – діареї з виділенням крові. Останній тип (ентероад-гезивні кишкові палички) вивчені ще недостатньо. При бактеріємії та інфекції сечовивідних шляхів часто висівають серогрупи 01, 02, 04, 06, 08, 09, 011, 018 та ін., при менінгітах – 01, 06, 07, 016, 018, 083.
Мікробіологічна діагностика ешерихіозів має особливо важливе значення, оскільки їх клінічні прояви характеризуються відсутністю патогномонічних симп-томів відносно збудника. Провідним залишається бактеріологічний діагноз. Його особливість полягає в тому, що виділення й ідентифікація збудника базується на визначенні його антигенної структури, а не на вивченні біохімічних властивостей.
Взяття матеріалу для дослідження. До початку етіотропного лікування у хворих беруть випорожнення, блювотні маси, дуоденальний вміст, кров, сечу, гній, спинномозкову рідину, від трупів – кров із серця, вміст кишок, шматочки легень, печінки, селезінки, нирок. При необхідності досліджують промивні води шлунка, залишки їжі, змиви з рук обслуговуючого персоналу, повітря палат тощо.
Бактеріоскопічне дослідження. В окремих випадках роблять первинну мікроскопію крові, сечі, ліквору, гнійних виділень, секретів слизових оболонок у мазках, забарвлених за Грамом. Виявлення грамнегативних паличок допомагає бактеріологові вибрати відповідні живильні середовища і наступні етапи лабора-торної діагностики. Початкова бактеріоскопія випорожнень не проводиться.
Бактеріологічне дослідження. З останніх порцій випорожнень тампоном беруть частину фекалій у пробірку з транспортним середовищем (30 % гліцерину
Частина ІІІ. Спеціальна мікробіологія
і 70 % фосфатного буфера) або безпосередньо біля ліжка хворого сіють на середо-вище Ендо (Левіна, Плоскирєва, Аселя-Лібермана). При цьому невелику кількість фекалій емульгують у 0,85 % розчині хлориду натрію у співвідношенні 1:10. Через кілька хвилин після осідання грубих решток 1-2 краплі рідини вносять на поверхню середовища і скляним шпателем розтирають її на невеликій ділянці. Відірвавши шпатель від агару, роблять посів на решту поверхні середовища. Якщо виникає потреба посіяти на другу і третю чашки, матеріал наносять повторно. Кров (10 мл) засівають у флакон із МПБ. Посів інших матеріалів роблять так само, як і випо-рожнень.
Після інкубації в термостаті при 37 0С протягом доби вивчають характер рос-ту на елективно-диференціальних середовищах. На агарі Ендо колонії мають дис-коподібну форму, злегка опуклі з рівними краями, малиново-червоного кольору. На середовищі Левіна вони забарвлені в темно-синій колір, а на середовищах Плоскірєва і Аселя-Лібермана – в рожевий. До складу останнього середовища входить агар, лактоза (або сахароза) та індикатор конго-червоний. Середовище із сахарозою використовують для індикації тих ентеропатогенних ешерихій, які фер-ментують цей вуглевод. У зв’язку з тим, що колонії патогенних і непатогенних кишкових паличок на вказаних середовищах не відрізняються, належність виділе-них культур до патогенних серогруп визначають за допомогою слайд-аглютинації з діагностичними полівалентними ОК-сироватками, або адсорбованими О-сиро-ватками, що містять антитіла до певних О-антигенів. Мікробіологічна промис-ловість випускає 5 наборів діагностичних ОК-сироваток: ОКА, ОКВ, ОКС, ОКД і ОКЕ. Основна полівалентна сироватка ОКА містить антитіла до О- і К-антигенів більше 20 головних серологічних груп. Суміш ОК-сироваток готують так, щоб кінцеве розведення кожної з них було 1:10. Аглютинують 10 лактозопозитивних колоній. Матеріал із кожної колонії беруть петлею так, щоб частина її залишилась для подальшого пересіву. Якщо одна з колоній дала позитивну слайд-аглютинацію, її залишок пересівають на середовище Олькеницького. Через 18-20 год врахову-ють ферментацію лактози і глюкози (пожовтіння та розрив стовпчика і скошеної частини агару), виділення Н2S (утворення чорного кільця на межі стовпчика і ско-шеної частини). Виділену культуру орієнтовно відносять до певної серогрупи.
Для остаточної ідентифікації збудника необхідно поставити розгорнуту ре-акцію аглютинації в пробірках для окремого виявлення його О- і К-антигенів. Діаг-ностичні аглютинуючі сироватки розводять у двох рядах пробірок (у першому – О-сироватку, у другому – К-сироватку) до титру, що вказаний на етикетках ампул. Для визначення О-антигену в кожну пробірку першого ряду вносять по 2 краплі 2-х млрд суспензії виділеної культури, прогрітої протягом 2 год при 100 0С. При кип’ятінні інактивується К-антиген, який локалізується поверхнево і затримує аглютинацію О-антигену. Останній при прогріванні не руйнується. Для виявлен-ня К-антигену в кожну пробірку другого ряду з розведеною до титру сироваткою вносять по 2 краплі суспензії живої (не кип’яченої культури). Пробірку вміщують у термостат при 37 0С на 18-20 год. При позитивній реакції розгорнутої аглюти-нації до титру (або принаймні до половини титру) роблять остаточний висновок
Розділ 11. Мікробіологічна діагностика окремих інфекційних захворювань 193
про виділення відповідного серовару патогенних ешерихій. Негативна слайд-аглютинація 10 лактозопозитивних колоній ешерихій дає право дати відповідь про відсутність ентеропатогенних кишкових паличок.
Виділену на середовищі Олькеницького культуру, що дала позитивну розгор-нуту реакцію аглютинації, сіють на середовища Гісса для вивчення її цукролітич-них, пептолітичних властивостей і рухливості. Після інкубації посівів протягом доби враховують результати. Патогенні ешерихії ферментують лактозу, глюкозу, мальтозу, маніт, сахарозу (окремі штами), арабінозу, ксилозу, трегалозу, утворю-ють індол, не виділяють H2S (деякі штами утворюють сірководень), не розклада-ють інозит і сечовину, не дезамінують фенілаланін, дають негативну реакцію Фогеса-Проскауера і не синтезують ДНК-азу. Для виявлення джерела інфекції проводять фаго- та коліцинотипування виділених культур.
Ідентифікація діареєгенних серотипів можлива також на основі виявлення специфічних маркерів. Культури типу ЕТКП продукують два види токсинів: тер-мостабільний виявляють на мишатах-сисунцях, термолабільний – на культурах Y1 надниркових залоз. Для швидкої ідентифікації ЕПКП використовують реак-цію коаглютинації на склі для виявлення білка зовнішньої мембрани. Серотипи ЕГКП, особливо серовар 0157: Н7, не ферментують сорбіт. Ентероінвазивні киш-кові палички (ЕІКП) викликають ко н ’юнктивіт у гвінейських свинок при внесенні бактерій у кон’юнктивальний мішок (тест Серені), нерухливі, не ферментують саліцин. Вони також виділяють шигаподібні токсини SLT-1 і SLT-2, які виявля-ють у випорожненнях хворих за допомогою ІФА. Адгезивні властивості ешерихій (ЕАКП) виявляють на культурах Hela і Hep-2.
Найшвидшим і високоспецифічним методом діагностики захворювань, вик-ликаних ентеропатогенними ешерихіями, є використання специфічних ДНК-зондів. Вони дають змогу виявити гени плазмід, що кодують патогенність кишкових па-личок або синтез їх цитотоксинів. Метод грунтується на тому, що одноланцюгова молекула ДНК може гібридизуватися з комплементарним до неї другим ланцю-гом ДНК. У більшості патогенних ешерихій гени вірулентності локалізовані у плазмідах. Отже, зондом для виявлення цих бактерій, можуть бути мічені послідов-ності, клоновані з таких плазмід.
Серологічне дослідження. Виявлення антиешерихіозних аглютинінів у си-роватці крові хворих з діагностичною метою в рутинній лабораторній практиці не знайшло широкого використання. Антитіла якщо й виявляються, то в низьких тит-рах (не вище 1:100). Для серологічної діагностики колі-інфекцій більш чутливою і специфічною є реакція непрямої гемаглютинації (РНГА). Специфічний антиген для цієї реакції виготовляють шляхом сенсибілізації еритроцитів барана суспен-зією 48 год агарової культури ешерихій, прогрітої 2 год при 100 °С. Отже, за допо-могою РНГА можна виявити лише О-антитіла, що може бути використано для диференціації захворювань від бактеріоносійства, особливо, якщо взяти для ре-акції еритроцитарний діагностикум з автоштамом.
Достовірність серологічної діагностики ешерихіозів зростає при виявленні окремих класів імуноглуболінів. Зміна підвищеної концентрації IgM на IgG обу-
Частина ІІІ. Спеціальна мікробіологія
мовлена гострим інфекційним процесом. Виявлення в сироватці крові антитіл лише класу IgG свідчить про бактеріоносійство.
Отже, лабораторна діагностика ешерихіозів основана на виділенні збудника захворювання і наступній ідентифікації патогенних і непатогенних штамів киш-кових паличок за допомогою діагностичних ОК-сироваток в орієнтованій і роз-горнутій реакціях аглютинації.
Дата добавления: 2015-09-03 | Просмотры: 1208 | Нарушение авторских прав
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 | 61 | 62 | 63 | 64 | 65 | 66 | 67 | 68 | 69 | 70 | 71 | 72 | 73 | 74 | 75 | 76 | 77 | 78 | 79 | 80 | 81 | 82 | 83 | 84 | 85 | 86 | 87 | 88 | 89 | 90 | 91 | 92 | 93 | 94 | 95 | 96 | 97 | 98 | 99 | 100 | 101 | 102 | 103 | 104 | 105 | 106 | 107 | 108 | 109 | 110 | 111 | 112 | 113 | 114 | 115 | 116 | 117 | 118 | 119 | 120 | 121 | 122 | 123 | 124 | 125 | 126 | 127 | 128 | 129 | 130 | 131 | 132 | 133 | 134 | 135 | 136 | 137 | 138 | 139 | 140 | 141 | 142 | 143 | 144 | 145 | 146 | 147 | 148 | 149 | 150 | 151 | 152 | 153 | 154 | 155 | 156 | 157 | 158 | 159 | 160 | 161 | 162 | 163 | 164 | 165 | 166 | 167 | 168 | 169 | 170 | 171 | 172 | 173 | 174 | 175 | 176 | 177 | 178 | 179 | 180 | 181 | 182 | 183 | 184 | 185 | 186 | 187 | 188 | 189 | 190 | 191 |
|