АкушерствоАнатомияАнестезиологияВакцинопрофилактикаВалеологияВетеринарияГигиенаЗаболеванияИммунологияКардиологияНеврологияНефрологияОнкологияОториноларингологияОфтальмологияПаразитологияПедиатрияПервая помощьПсихиатрияПульмонологияРеанимацияРевматологияСтоматологияТерапияТоксикологияТравматологияУрологияФармакологияФармацевтикаФизиотерапияФтизиатрияХирургияЭндокринологияЭпидемиология

Методы лабораторной диагностики

Основными показаниями для назначения лабораторных методов аллергодиагностики, которые проводятся in vitro, являются:

Ú ранний детский возраст;

Ú пациенты с высокой степенью сенсибилизации;

Ú непрерывно рецидивирующее течение заболевания без периодов ремиссии;

Ú невозможность отмены антигистаминных и других препаратов;

Ú поливалентная сенсибилизация, когда нет возможности провести тестирование in vivo сразу со всеми предполагаемыми аллергенами в ограниченные сроки обследования;

Ú резко изменённая реактивность кожи;

Ú ложноположительный или ложноотрицательный результат при кожном тестировании;

Ú уртикарный дермографизм.

Основными преимуществами методов специфической аллергодиагностики in vitro являются:

Ú безопасность для больного;

Ú высокая информативность;

Ú возможность проведения исследования в случае, когда больной находится от аллерголога на большом расстоянии и доставлена лишь сыворотка больного;

Ú малое количество крови, необходимое для исследования.

В клинической практике наиболее широко используют следующие методы специфической диагностики, проводимые in vitro:

Ú метод иммуноферментного анализа (ИФА) для выявления специфических IgE (рис. 34);

Ú радиоаллергосорбентный тест (PACT) для выявления специфических IgE (рис. 35);

Ú непрямой базофильный тест (тест Шелли);

Ú прямой базофильный тест (тест Шелли);

Ú реакция специфического высвобождения гистамина из базофилов периферической крови больного (по P.Scov, S.Norne, B.Weeke).

Рис. 34. Иммуноферментный анализ (схема).

Рис. 35. Проведение радиоаллергосорбентного теста (схема).

ИФА, радиоаллергосорбентный тест, непрямой и прямой базофильные тесты являются вспомогательными методами специфической аллергодиагностики при реакциях немедленного типа.

Иммуноферментный анализ (ИФА) в настоящее время является одним из распространённых методов исследования. С помощью иммуноферментного анализа производится количественное определение аллерген–специфических IgE в крови больного.

Принцип метода заключается в том, что на первом этапе исследования испытуемый аллерген ковалентно связывается с твёрдой фазой (бумажный диск, активированный полимер и др.).

При добавлении сыворотки больного происходит связывание аллергена, фиксированного на твёрдой фазе, с АТ, если в сыворотке присутствуют соответствующие данному аллергену АТ.

После отмывания несвязавшихся IgE добавляются АТ против IgE, меченные флуорохромом (пероксидазой хрена, b–галактозидазой и др.). Происходит образование комплекса: аллерген на твёрдой фазе + специфический IgE + АТ анти–IgE (АТ против IgE). Несвязавшиеся АТ удаляются.

Уровни специфического IgE–связывания определяются по интенсивности свечения (реакция оценивается в интервале 1–4 класса). Чем выше показатель свечения по отношению к негативному контролю (сыворотка, в которой отсутствуют специфические IgE–АТ), тем больше специфических IgE в сыворотке пациента.

Специфический характер реакции учитывается на основе позитивного контроля (IgE–связывание интенсивностью 4 класса).

Ценность этого метода состоит в том, что для его проведения сразу с большим количеством аллергенов требуется небольшое количество сыворотки.

Радиоаллергосорбентный тест (PACT). С помощью этого метода также производится количественное определение аллерген–специфических IgE в крови. Аллерген, соединенный ковалентно с бумажным диском, реагирует со специфическим IgE крови больного. После отмывания неспецифического IgE добавляют радиоактивно меченный (¹²⁵I) анти–IgE. Образуется комплекс специфического IgE + меченый анти–IgE. Радиоактивность этого комплекса измеряют с помощью g–счётчика. Чем больше радиоактивность, тем выше содержание специфического IgE в крови больного.

Для измерения общего и аллерген–специфических IgE используют стандартные наборы (панели) аллергенов.

Для определения IgE в сыворотке крови больных применяются методы, основанные на эффекте хемилюминесценции. Принцип постановки тестов такой же, как и в ИФА и радиоаллергосорбентном тесте, однако в качестве индикатора реакции используют фотореагенты (А, В, С, D), свечение которых (тест MAST–CLA) регистрируется на плёнке, на фотометре (рис. 36).

Специфические Аг обнаруживают при помощи ELISA–теста (рис. 37).

Рис. 36. MAST–CLA–тест (схема).

Рис. 37. ELISA–тест (схема).

Рис. 38. Реакция бласттрансформации лимфоцитов (схема).

Для диагностики аллергических реакций, протекающих по механизмам ГЗТ, например при пищевой и лекарственной аллергии, применяют тест бласттрансформации лимфоцитов (рис. 38).

Непрямой базофильный тест (тест Шелли) основан на изучении морфологических изменений базофилов в результате взаимодействия сыворотки больного и специфического аллергена. Краситель нейтральный красный избирательно окрашивает гранулы базофилов в кирпично-красный цвет, что позволяет отличать их от других клеток. Реакцию наблюдают под микроскопом с иммерсионной системой. Неизменённые базофилы имеют округлую форму; гранулы, окрашенные краской, располагаются внутри клетки.

Положительная реакция проявляется деформацией клеток, образованием псевдоподий, усиленным движением гранул и в редких случаях — выходом гранул из клетки с разрывом её. В каждом препарате сосчитывают 40 базофилов, вычисляют процент морфологически изменённых клеток и в опыте, и в контроле.

Условно выделяют 3 степени реакции: слабая — процент изменённых базофилов в опыте превышает таковой в контроле на 10%, умеренная — на 15%, резко положительная — на 20% и более. Во всех случаях имеют в виду результаты контроля с наивысшей неспецифической реакцией базофилов.

Прямой базофильный тест (тест Шелли) основан на изучении морфологических изменений базофилов в периферической крови больного аллергическим заболеванием при взаимодействии со специфическим аллергеном. Оценку реакции проводят аналогично оценке при непрямом базофильном тесте.

Реакция высвобождения гистамина (по Scov P. et al. ) из базофилов периферической крови человека основана на учете процента высвобождения гистамина после обработки базофильных клеток специфическими аллергенами.

Данные методы выявляют только состояние сенсибилизации, т.е. наличие АТ при немедленном типе гиперчувствительности свидетельствует о том, что у обследуемого пациента был контакт с данным аллергеном. Указанные тесты не могут являться бесспорным доказательством того, что на данный аллерген разовьется аллергическая реакция, так как для возникновения и проявления аллергической реакции недостаточно лишь наличия сенсибилизации к аллергену, необходим ещё ряд дополнительных условий. Методы лабораторной диагностики рассматривают в качестве дополнительных мер, позволяющих уточнить сомнительные результаты тестирования in vivo. Постановка диагноза должна основываться в основном на данных аллергоанамнеза, осмотра больного, результатах постановки кожных проб и провокационных тестов, а также данных общеклинического обследования пациента.

Дата добавления: 2014-12-12 | Просмотры: 1121 | Нарушение авторских прав